| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第14-15页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第14页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌作用 | 第14-15页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫机理 | 第15-17页 |
| 1.2.1 昆虫中肠内环境 | 第15-16页 |
| 1.2.2 苏云金芽胞杆菌杀虫机制 | 第16-17页 |
| 1.3 培养条件pH变化对细菌生长情况的影响 | 第17页 |
| 1.4 碱刺激条件下枯草芽胞杆菌转录组分析 | 第17-18页 |
| 1.5 细菌耐碱适应机制 | 第18-21页 |
| 1.5.1 离子转运系统在碱性条件下的作用 | 第18-19页 |
| 1.5.2 色氨酸与磷酸化系统在碱性条件下的作用 | 第19页 |
| 1.5.3 细胞质pH的测定方法 | 第19-20页 |
| 1.5.4 碱性条件对细菌基础代谢的影响 | 第20页 |
| 1.5.5 乳酸脱氢酶主要作用 | 第20-21页 |
| 1.6 立题依据与目的意义 | 第21-22页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.6.2 目的意义 | 第21页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基与抗生素 | 第23页 |
| 2.1.3 生化试剂材料 | 第23-24页 |
| 2.1.4 引物列表 | 第24-27页 |
| 2.1.5 溶液与缓冲液 | 第27页 |
| 2.2 仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.3 试验研究方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 碱性条件适应研究方法 | 第28页 |
| 2.3.2 Bt基因组提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 菌液模板制备 | 第29页 |
| 2.3.4 目的片段的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.5 PCR产物纯化、切胶回收 | 第30页 |
| 2.3.6 酶切反应 | 第30页 |
| 2.3.7 连接反应 | 第30页 |
| 2.3.8 大肠杆菌(TG1、ET)感受态制备及转化 | 第30-31页 |
| 2.3.9 Bt电击感受态的制备与转化 | 第31页 |
| 2.3.10 E.coli质粒提取 | 第31页 |
| 2.3.11 序列测定及分析 | 第31页 |
| 2.3.12 Bt总RNA提取(TRIzol法) | 第31-32页 |
| 2.3.13 RNA中去除DNA操作 | 第32页 |
| 2.3.14 抽提纯化RNA | 第32页 |
| 2.3.15 cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.3.16 实时荧光定量PCR扩增(Real Time PCR) | 第33页 |
| 2.3.17 同源重组突变体的获得 | 第33页 |
| 2.3.18 突变体生长曲线测定 | 第33-34页 |
| 2.3.19 β半乳糖苷酶活性分析 | 第34页 |
| 2.3.20 SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-66页 |
| 3.1 HD73在碱性条件下的适应性 | 第35-37页 |
| 3.1.1 低浓度细胞耐碱适应情况 | 第35-36页 |
| 3.1.2 高浓度细胞耐碱适应情况 | 第36-37页 |
| 3.2 碱刺激芯片数据分析 | 第37-45页 |
| 3.2.1 HD73全基因组GO分析及COG分析 | 第38-39页 |
| 3.2.2 碱性条件对Bt细胞膜组分的影响 | 第39-42页 |
| 3.2.3 碱刺激条件下HD73基础代谢分析：对糖酵解途径的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.4 碱刺激条件下HD73基础代谢分析：对苹果酸合成途径的影响 | 第43页 |
| 3.2.5 碱刺激条件下HD73基础代谢分析：对脂类合成与代谢途径的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.6 碱性条件下HD73基础代谢分析：对氨基酸合成与代谢的影响 | 第44-45页 |
| 3.3 乳酸脱氢酶基因ldh2的研究 | 第45-51页 |
| 3.3.1 ldh2突变体的构建 | 第46-48页 |
| 3.3.2 ldh2重组质粒的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 ldh2重组质粒同源重组插入突变体的筛选与验证 | 第49-50页 |
| 3.3.4 ldh2的转录调控因子分析 | 第50-51页 |
| 3.4 转录调控因子Crp的研究 | 第51-55页 |
| 3.4.1 crp基因插入突变盒的构建 | 第52-53页 |
| 3.4.2 crp重组质粒的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.4.3 crp重组质粒同源重组插入突变体的筛选与验证 | 第54-55页 |
| 3.5 HD(Δldh2)、HD(Δcrp)突变体表型 | 第55-57页 |
| 3.5.1 HD(Δldh2)突变体耐碱性适应生长曲线 | 第55-56页 |
| 3.5.2 HD(Δcrp)突变体耐碱性适应生长曲线 | 第56-57页 |
| 3.6 Crp的转录调控作用 | 第57-63页 |
| 3.6.1 ldh2受转录调控因子Crp调控 | 第58-59页 |
| 3.6.2 HD73_0158 不受转录调控因子Crp调控 | 第59-60页 |
| 3.6.3 HD73_0493 不受转录调控因子Crp调控 | 第60-62页 |
| 3.6.4 HD73_2700 不受转录调控因子Crp调控 | 第62-63页 |
| 3.7 Crp蛋白的表达 | 第63-66页 |
| 3.7.1 pET21b-crp融合表达质粒的构建 | 第63-65页 |
| 3.7.2 Crp蛋白的表达 | 第65-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-69页 |
| 4.1 碱性条件下细胞适应生长机制 | 第66-67页 |
| 4.2 转录调控因子Crp的转录调控作用 | 第67-68页 |
| 4.3 下一步展望 | 第68-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
