| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 食线虫真菌及真菌GPCR蛋白的研究进展 | 第13-27页 |
| 1 植物病原线虫的危害及食线虫真菌在生物防治中的作用 | 第13页 |
| 2 捕食线虫真菌基因组研究进展 | 第13-15页 |
| 3 真菌G蛋白信号途径研究进展 | 第15-17页 |
| 4 真菌GPCR功能研究进展 | 第17-25页 |
| 4.1 真菌GPCR及其结构 | 第17-18页 |
| 4.2 真菌GPCR的分类 | 第18-23页 |
| 4.3 真菌GPCR的功能 | 第23-25页 |
| 5 本论文的选题依据和研究意义 | 第25-27页 |
| 第二章 寡孢节丛孢GPCR蛋白的序列特征和聚类分析 | 第27-38页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-28页 |
| 2.1 GPCR蛋白序列来源 | 第27页 |
| 2.2 寡孢节丛孢GPCR蛋白功能结构域分析 | 第27-28页 |
| 2.3 构建寡孢节丛孢GPCR蛋白的NJ树 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-36页 |
| 3.1 寡孢节丛孢11个GPCR蛋白的分类 | 第28页 |
| 3.2 寡孢节丛孢GPCR蛋白的分子量、等电点和功能结构域分析 | 第28-34页 |
| 3.3 GPCR蛋白的系统进化分析 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36页 |
| 5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 寡孢节丛孢GPCR基因敲除载体的构建 | 第38-54页 |
| 1 前言 | 第38页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第38-40页 |
| 2.1 实验菌株和质粒 | 第38页 |
| 2.2 敲除帮基因序列号 | 第38-39页 |
| 2.3 主要溶液及培养基 | 第39页 |
| 2.4 主要药品及试剂盒 | 第39-40页 |
| 2.5 主要仪器及设备 | 第40页 |
| 3 实验操作方法 | 第40-48页 |
| 3.1 靶基因敲除载体的构建方法 | 第40-41页 |
| 3.2 敲除引物设计 | 第41-44页 |
| 3.3 pCSN44质粒的提取 | 第44-45页 |
| 3.4 双酶切pRS426质粒及片段纯化回收 | 第45页 |
| 3.5 寡孢节丛孢基因组的提取 | 第45页 |
| 3.6 三个目的片段的扩增及片段的纯化回收 | 第45-47页 |
| 3.7 FY834酵母感受态的制备及电转化 | 第47页 |
| 3.8 酵母转化子的质粒提取 | 第47页 |
| 3.9 酵母转化子验证 | 第47-48页 |
| 4 实验结果 | 第48-52页 |
| 4.1 pRS426质粒酶切及hph片段扩增 | 第48-49页 |
| 4.2 寡孢节丛孢中11个GPCR基因5'端和3'端同源片段扩增 | 第49-50页 |
| 4.3 电转化酵母结果 | 第50-51页 |
| 4.4 FY834酵母转化子PCR验证 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 6 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 A.oligospora原生质体的制备、转化及转化子的筛选和验证 | 第54-64页 |
| 1 前言 | 第54页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第54-56页 |
| 2.1 实验菌株 | 第54-55页 |
| 2.2 主要溶液及培养基 | 第55页 |
| 2.3 主要药品及试剂盒 | 第55-56页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第56页 |
| 3 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.1 敲除载体全长片段扩增及回收 | 第56页 |
| 3.2 寡孢节丛孢原生质体的制备 | 第56页 |
| 3.3 寡孢节丛孢原生质体的转化 | 第56页 |
| 3.4 寡孢节丛孢敲除转化子基因组提取 | 第56页 |
| 3.5 敲除转化子的PCR验证方法 | 第56-57页 |
| 3.6 敲除转化子特异性验证引物序列 | 第57-58页 |
| 4 实验结果 | 第58-62页 |
| 5 对论 | 第62-63页 |
| 6 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 GPCR基因敲除菌株与野生型菌株的表型特征比较 | 第64-76页 |
| 1 前言 | 第64页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第64-65页 |
| 2.1 实验操作菌株 | 第64页 |
| 2.2 主要培养基 | 第64-65页 |
| 2.3 主要药品 | 第65页 |
| 2.4 实验主要仪器及设备 | 第65页 |
| 3 实验操作方法 | 第65页 |
| 3.1 在不同培养基上生长速率的比较 | 第65页 |
| 3.2 抗逆性生长情况比较 | 第65页 |
| 3.3 胞外蛋白酶活性比较 | 第65页 |
| 3.4 产孢的比较 | 第65页 |
| 3.5 产捕食器官(三维菌网)能力比较 | 第65页 |
| 4 实验结果 | 第65-73页 |
| 4.1 在不同培养基上生长速率的比较 | 第65-68页 |
| 4.2 抗逆性生长测试结果 | 第68-69页 |
| 4.3 胞外蛋白酶活性比较 | 第69页 |
| 4.4 产孢数量的比较 | 第69-71页 |
| 4.5 产三维菌网的比较 | 第71-73页 |
| 5 讨论 | 第73-75页 |
| 5.1 敲除株与野生株在生长速率、抗逆性、产胞外蛋白酶方面的比较 | 第73-74页 |
| 5.2 产孢比较 | 第74页 |
| 5.3 产捕器比较 | 第74-75页 |
| 6 本章小结 | 第75-76页 |
| 全文小结及存在的问题 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 附录1 实验中使用的质粒图谱 | 第83-84页 |
| 附录2 本文中使用的名词缩写及其中英文对照 | 第84-85页 |
| 附录3 硕士在读期间参加的科研项目及参与发表的学术论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
