天然釉原蛋白的分离纯化、结构表征及生物学功能研究
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要符号表 | 第10-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-42页 |
| 1.1 生物矿化大分子及生物矿物 | 第16页 |
| 1.2 生物矿化大分子研究意义 | 第16-17页 |
| 1.3 牙釉质及其矿化过程 | 第17-21页 |
| 1.3.1 牙釉质的分级结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 牙釉质的矿化过程 | 第20-21页 |
| 1.4 牙釉质生物矿化大分子 | 第21-29页 |
| 1.4.1 釉原蛋白 | 第22-25页 |
| 1.4.2 釉蛋白 | 第25-26页 |
| 1.4.3 鞘蛋白 | 第26-27页 |
| 1.4.4 釉丛蛋白 | 第27-28页 |
| 1.4.5 蛋白酶 | 第28-29页 |
| 1.5 釉原蛋白的纯化及制备 | 第29-32页 |
| 1.5.1 天然釉原蛋白的纯化 | 第29-31页 |
| 1.5.2 重组釉原蛋白的设计和纯化 | 第31-32页 |
| 1.6 釉原蛋白的自组装及解自组装 | 第32-35页 |
| 1.6.1 釉原蛋白的自组装 | 第32-34页 |
| 1.6.2 釉原蛋白的解自组装 | 第34-35页 |
| 1.7 釉原蛋白与无机相相互作用 | 第35-36页 |
| 1.8 釉原蛋白用于组织修复 | 第36-40页 |
| 1.8.1 牙科修复 | 第37页 |
| 1.8.2 骨修复 | 第37-39页 |
| 1.8.3 难愈性创伤修复 | 第39-40页 |
| 本研究的目的、意义和主要研究内容 | 第40-42页 |
| 第二章 猪釉原蛋白组分的提纯和鉴定 | 第42-61页 |
| 2.1 引言 | 第42-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 2.2.1 原料、试剂与仪器 | 第43-45页 |
| 2.2.2 粗提釉原蛋白的制备 | 第45页 |
| 2.2.3 粗提釉原蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第45-46页 |
| 2.2.4 反相高效液相色谱纯化粗提釉原蛋白 | 第46页 |
| 2.2.5 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 | 第46页 |
| 2.2.6 蛋白N端测序 | 第46-47页 |
| 2.2.7 高分辨质谱确定蛋白分子量 | 第47页 |
| 2.2.8 生物信息学分析 | 第47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-59页 |
| 2.3.1 电泳检测粗提蛋白组分 | 第47-48页 |
| 2.3.2 反相高效液相色谱制度确定 | 第48-55页 |
| 2.3.3 蛋白纯度分析 | 第55-57页 |
| 2.3.4 蛋白N端测序 | 第57-58页 |
| 2.3.5 蛋白质身份鉴定 | 第58-59页 |
| 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 釉原蛋白与钙离子的相互作用 | 第61-79页 |
| 3.1 引言 | 第61-62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-65页 |
| 3.2.1 原料、试剂与仪器 | 第62-63页 |
| 3.2.2 釉原蛋白储备液的配备及浓度确定 | 第63页 |
| 3.2.3 等温量热滴定 | 第63-64页 |
| 3.2.4 同步荧光光谱 | 第64页 |
| 3.2.5 动态光散射 | 第64页 |
| 3.2.6 圆二色谱 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-78页 |
| 3.3.1 釉原蛋白储备液蛋白浓度确定 | 第65-66页 |
| 3.3.2 P173的等温量热滴定 | 第66-69页 |
| 3.3.3 P148的同步荧光光谱 | 第69-72页 |
| 3.3.4 釉原蛋白粒径分布 | 第72-75页 |
| 3.3.5 釉原蛋白二级结构 | 第75-78页 |
| 本章小结 | 第78-79页 |
| 第四章 釉原蛋白与羟基磷灰石的相互作用 | 第79-94页 |
| 4.1 引言 | 第79-80页 |
| 4.2 材料与方法 | 第80-83页 |
| 4.2.1 原料、试剂与仪器 | 第80-81页 |
| 4.2.2 纳米牙釉晶体颗粒的提取 | 第81页 |
| 4.2.3 纳米牙釉晶体颗粒原子力显微镜表征 | 第81页 |
| 4.2.4 纳米牙釉晶体颗粒透射电镜表征 | 第81页 |
| 4.2.5 羟基磷灰石晶片表面形貌分析 | 第81页 |
| 4.2.6 石英微晶天平 | 第81-83页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第83-93页 |
| 4.3.1 纳米牙釉颗粒的形貌分析 | 第83-84页 |
| 4.3.2 纳米牙釉颗粒的晶型分析 | 第84-85页 |
| 4.3.3 感应器羟基磷灰石膜层形貌分析及对比 | 第85-86页 |
| 4.3.4 釉原蛋白吸附的频率和耗散 | 第86-88页 |
| 4.3.5 釉原蛋白成膜性质分析 | 第88-89页 |
| 4.3.6 釉原蛋白在羟基磷灰石晶面上的成膜机理 | 第89-91页 |
| 4.3.7 全长釉原蛋白动态吸附机理 | 第91-93页 |
| 本章小结 | 第93-94页 |
| 第五章 釉原蛋白对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 | 第94-106页 |
| 5.1 引言 | 第94-95页 |
| 5.2 材料与方法 | 第95-98页 |
| 5.2.1 原料、试剂与仪器 | 第95-96页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第96页 |
| 5.2.3 蛋白处理和加入 | 第96页 |
| 5.2.4 细胞增殖分析 | 第96页 |
| 5.2.5 细胞的成骨分化诱导 | 第96-97页 |
| 5.2.6 碱性磷酸酶活性测定 | 第97页 |
| 5.2.7 成骨相关基因表达测试 | 第97页 |
| 5.2.8 茜素红染色 | 第97-98页 |
| 5.2.9 数据分析与处理 | 第98页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第98-104页 |
| 5.3.1 骨髓间质干细胞增殖情况 | 第98-99页 |
| 5.3.2 成骨相关基因表达情况 | 第99-102页 |
| 5.3.3 碱性磷酸酶活性测定 | 第102-103页 |
| 5.3.4 茜素红染色分析 | 第103-104页 |
| 本章小结 | 第104-106页 |
| 结论 | 第106-108页 |
| 本论文的创新性 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-138页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附件 | 第141页 |
