| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 L-茶氨酸简介 | 第14-17页 |
| 1.1.1 L-茶氨酸的性质 | 第14页 |
| 1.1.2 L-茶氨酸的生理功能 | 第14-16页 |
| 1.1.3 L-茶氨酸的应用前景 | 第16-17页 |
| 1.2 L-茶氨酸的制备方法 | 第17-22页 |
| 1.2.1 直接提取法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 细胞培养法 | 第18页 |
| 1.2.3 化学合成法 | 第18-19页 |
| 1.2.4 微生物酶促合成法 | 第19-22页 |
| 1.3 γ-谷氨酰基转移酶 | 第22-26页 |
| 1.3.1 GGT简介 | 第22页 |
| 1.3.2 GGT的催化性质 | 第22-23页 |
| 1.3.3 GGT的结构 | 第23-25页 |
| 1.3.4 GGT的应用前景 | 第25-26页 |
| 1.4 本课题的研究思路与主要内容 | 第26-27页 |
| 第二章 GGT在大肠杆菌中的重组表达、分离纯化与性质研究 | 第27-52页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.2.1 质粒与菌株 | 第27-28页 |
| 2.2.2 工具酶与主要试剂 | 第28页 |
| 2.2.3 试剂配置 | 第28-29页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第29-31页 |
| 2.2.5 培养基 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 目的基因的获取 | 第31-33页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第33页 |
| 2.3.3 重组菌株构建 | 第33页 |
| 2.3.4 重组质粒的验证 | 第33-34页 |
| 2.3.5 GGT的诱导表达 | 第34页 |
| 2.3.6 GGT诱导表达条件优化 | 第34-35页 |
| 2.3.7 GGT的亲和纯化 | 第35页 |
| 2.3.8 SDS-PAGE电泳验证 | 第35-36页 |
| 2.3.9 GGT的酶活测定 | 第36页 |
| 2.3.10 GGT的酶学性质 | 第36-37页 |
| 2.3.11 重组菌在30 L发酵罐上的发酵 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 重组质粒与重组菌株的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.2 重组菌诱导表达条件优化 | 第40-45页 |
| 2.4.3 E.coli与B.subtilis来源的GGT酶学性质与比较 | 第45-49页 |
| 2.4.4 发酵罐上的放大 | 第49-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 大肠杆菌来源的GGT催化合成L-茶氨酸的研究 | 第52-82页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.1 菌株 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第53页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第53页 |
| 3.2.4 培养基 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.3.1 催化剂形式的考察 | 第53-54页 |
| 3.3.2 副反应的考察 | 第54页 |
| 3.3.3 L-茶氨酸合成条件的优化 | 第54-55页 |
| 3.3.4 检测方法 | 第55-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-80页 |
| 3.4.1 GGT催化剂形式的比较 | 第57-58页 |
| 3.4.2 GGT催化的副反应分析 | 第58-66页 |
| 3.4.3 GGT催化L-茶氨酸合成条件的优化 | 第66-79页 |
| 3.4.4 最优条件下L-茶氨酸的合成反应 | 第79-80页 |
| 3.5 本章总结 | 第80-82页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌来源的GGT催化L-茶氨酸的合成 | 第82-93页 |
| 4.1 引言 | 第82页 |
| 4.2 实验材料 | 第82-83页 |
| 4.2.1 菌株 | 第82页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第82页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第82-83页 |
| 4.2.4 培养基 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-84页 |
| 4.3.1 L-茶氨酸合成条件的优化 | 第83页 |
| 4.3.2 最优条件下催化合成L-茶氨酸 | 第83-84页 |
| 4.3.3 L-谷氨酰胺补料实验 | 第84页 |
| 4.3.4 检测方法 | 第84页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第84-92页 |
| 4.4.1 L-茶氨酸合成条件的优化 | 第84-89页 |
| 4.4.2 E. coli与B.subtilis来源的GGT催化L-茶氨酸合成的比较 | 第89-90页 |
| 4.4.3 分批补料实验结果 | 第90-92页 |
| 4.5 本章小结 | 第92-93页 |
| 第五章 L-茶氨酸的分离纯化 | 第93-104页 |
| 5.1 引言 | 第93页 |
| 5.2 实验材料 | 第93-94页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第93页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第93-94页 |
| 5.3 实验方法 | 第94-96页 |
| 5.3.1 酶促反应液预处理 | 第94页 |
| 5.3.2 离子交换树脂的预处理 | 第94-95页 |
| 5.3.3 阳离子交换树脂的筛选 | 第95页 |
| 5.3.4 静态吸附实验 | 第95页 |
| 5.3.5 动态实验 | 第95页 |
| 5.3.6 L-茶氨酸的结晶 | 第95页 |
| 5.3.7 检测方法 | 第95-96页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第96-103页 |
| 5.4.1 酶促反应液中存在的物质 | 第96页 |
| 5.4.2 反应液的预处理 | 第96-98页 |
| 5.4.3 阳离子树脂的筛选 | 第98页 |
| 5.4.4 树脂的静态吸附实验 | 第98-100页 |
| 5.4.5 树脂的动态吸附平衡 | 第100-102页 |
| 5.4.6 L-茶氨酸的结晶与鉴定 | 第102-103页 |
| 5.4.7 L-茶氨酸回收率的计算 | 第103页 |
| 5.5 本章总结 | 第103-104页 |
| 第六章 总结与展望 | 第104-107页 |
| 6.1 结论 | 第104-105页 |
| 6.2 展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
| 教育简历 | 第113页 |
| 攻读硕士学位论文期间主要科研成果 | 第113页 |
