| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 芥酸的合成及调控研究 | 第14-18页 |
| 1.1 芥酸合成代谢途径的研究 | 第14-16页 |
| 1.2 芥酸调控研究进展 | 第16-18页 |
| 2 miRNA发现与研究 | 第18-28页 |
| 2.1 植物microRNA的合成及作用机制 | 第18-21页 |
| 2.2 miRNA的研究方法 | 第21-23页 |
| 2.3 miRNA的表达研究 | 第23-25页 |
| 2.4 miRNA靶基因研究方法 | 第25-27页 |
| 2.5 miRNA的功能研究 | 第27页 |
| 2.6 甘蓝型油菜相关miRNA的研究进展 | 第27-28页 |
| 3 人工miRNA研究 | 第28-32页 |
| 3.1 amiRNA原理及特点 | 第29页 |
| 3.2 amiRNA的设计 | 第29-30页 |
| 3.3 amiRNA在植物中的应用研究进展 | 第30-32页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第32-33页 |
| 第二章 生物信息学分析芥酸合成代谢相关保守miRNA及鉴定 | 第33-46页 |
| 1 材料和方法 | 第33-34页 |
| 1.1 数据来源 | 第33页 |
| 1.2 数据分析软件 | 第33页 |
| 1.3 pre-miRNA的预测 | 第33-34页 |
| 1.4 试验材料、试剂及仪器 | 第34页 |
| 2 保守miRNA的验证 | 第34-37页 |
| 2.1 甘蓝型油菜种子miRNA的提取 | 第35页 |
| 2.2 miRNA反转录 | 第35-36页 |
| 2.3 miRNA PCR及q-PCR体系及程序 | 第36-37页 |
| 3 本项研究技术路线 | 第37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-43页 |
| 4.1 miRNA与靶基因的匹配 | 第38-39页 |
| 4.2 预测的miRNA及其前体序列的特征 | 第39-41页 |
| 4.3 PCR和q-PCR验证miRNA | 第41-43页 |
| 5 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 高通量测序识别芥酸合成代谢相关miRNA及其靶基因检测 | 第46-72页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| 2 研究方法 | 第46-50页 |
| 2.1 miRNA测序及数据分析 | 第46-48页 |
| 2.2 降解组测序及数据分析 | 第48页 |
| 2.3 miRNA靶基因的生物学预测及注释 | 第48-50页 |
| 2.4 qPCR验证miRNA及其靶基因 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-67页 |
| 3.1 RNA的质量检测 | 第50页 |
| 3.2 miRNA测序序列特征 | 第50-53页 |
| 3.3 miRNA的识别与特征 | 第53-58页 |
| 3.4 降解组测序数据分析 | 第58页 |
| 3.5 miRNA靶基因的生物信息学预测及功能注释 | 第58-64页 |
| 3.6 芥酸代谢相关miRNA及其靶基因 | 第64-66页 |
| 3.7 筛选miRNA及其靶基因的表达 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-72页 |
| 4.1 研究的目的与意义 | 第67-68页 |
| 4.2 芥酸代谢相关miRNA | 第68-71页 |
| 4.3 甘蓝型油菜种子miRNA研究现状 | 第71-72页 |
| 第四章 amiRNA调控甘蓝型油菜芥酸研究 | 第72-93页 |
| 1 实验材料 | 第72页 |
| 2 实验方法 | 第72-80页 |
| 2.1 人工miRNA片段的克隆 | 第72-74页 |
| 2.2 克隆片段的回收 | 第74页 |
| 2.3 克隆片段与克隆载体的连接与转化 | 第74-75页 |
| 2.4 目标片段连接到表达载体pCENN | 第75-77页 |
| 2.5 表达载体构建示意图 | 第77-78页 |
| 2.6 pCENNE和pCENND表达载体转化农杆菌 | 第78页 |
| 2.7 甘蓝型油菜遗传转化研究 | 第78-80页 |
| 2.8 阳性株T_0代种子分析 | 第80页 |
| 3 结果与分析 | 第80-90页 |
| 3.1 amiRNAE1和amiRNAD2的克隆 | 第80-82页 |
| 3.2 amiRNAET的验证 | 第82-84页 |
| 3.3 表达载体pCENN的验证 | 第84-85页 |
| 3.4 表达载体的连接与转化 | 第85-86页 |
| 3.5 表达载体转化农杆菌验证 | 第86页 |
| 3.6 甘蓝型油菜的遗传转化及转化阳性植株的鉴定 | 第86-89页 |
| 3.7 转化植株种子基因表达和脂肪酸组成分析 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 第五章 结论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 附表 | 第108-114页 |
| 5.1 MS培养基的配置 | 第108页 |
| 5.2 YEP（Yeast Extract Peptone）培养基的配制 | 第108-109页 |
| 5.3 LB培养基的配置 | 第109页 |
| 5.4 遗传转化培养基的配置 | 第109页 |
| 5.5 大肠杆菌DH5α 感受态细胞制备 | 第109-110页 |
| 5.6 菌液质粒DNA的提取 | 第110-111页 |
| 5.7 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第111页 |
| 5.8 CTAB提取植物样品DNA | 第111页 |
| 5.9 TRIZOL法提取RNA | 第111-112页 |
| 5.10 mRNA反转录 | 第112-113页 |
| 5.11 遗传转化抗生素和植物激素的配制方法 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 导师简介 | 第115-116页 |
| 作者简介 | 第116-117页 |
