| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 背景介绍 | 第10-22页 |
| 1.1 有机磷农药残留检测的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 有机磷农药简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 有机磷农药的特点 | 第11-12页 |
| 1.1.3 有机磷农药残留检测分析方法 | 第12-14页 |
| 1.1.4 不同残留检测的方法的比较 | 第14页 |
| 1.2 酶抑制法用于检测有机磷农药的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 胆碱酯酶的性质、功能以及晶体结构 | 第14-17页 |
| 1.2.2 有机磷农药与胆碱酯酶的相互作用研究 | 第17页 |
| 1.2.3 现有改造胆碱酯酶的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3 选题依据和研究思路 | 第20-22页 |
| 第二章 靶向机磷农药残留的丁酰胆碱酯酶突变体的合理设计 | 第22-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 实验溶液的配置 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 定点突变 | 第25页 |
| 2.2.2 氯化钙方法制备感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.3 质粒在大肠杆菌的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 试剂盒提取质粒并测定所提取质粒的浓度和纯度 | 第27页 |
| 2.2.5 琼脂糖核酸电泳 | 第27-28页 |
| 2.2.6 人体胚肾细胞Hek293的培养 | 第28-29页 |
| 2.2.7 质粒在真核细胞中的转染表达 | 第29-30页 |
| 2.2.8 SDS-聚丙烯凝胶电泳检测蛋白质 | 第30-31页 |
| 2.2.9 丁酰胆碱酯酶突变体的纯化方法 | 第31-32页 |
| 2.3 实验步骤 | 第32-33页 |
| 2.3.1 粗酶液的获得 | 第32页 |
| 2.3.2 酶促动力学反应体系 | 第32-33页 |
| 2.4 实验原理和实验数据处理 | 第33-36页 |
| 2.4.1 测活原理 | 第33-34页 |
| 2.4.2 酶促动力学常数K_m和v_(max)的处理方法 | 第34-35页 |
| 2.4.3 酶与有机磷农药的双分子速率常数k_i解离常数K_d磷酰化速率常数k_p | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 有机磷农药对丁酰胆碱酯酶突变体的抑制动力学研究 | 第37-55页 |
| 3.1 突变丁酰胆碱酯酶的获得 | 第37-40页 |
| 3.1.1 人丁酰胆碱酯酶突变位点的确定 | 第37-38页 |
| 3.1.2 人丁酰胆碱酯酶突变体质粒的获得 | 第38-39页 |
| 3.1.3 突变酶的表达 | 第39页 |
| 3.1.4 代表性突变体A328W的纯化结果 | 第39-40页 |
| 3.2 酶与底物动力学表征 | 第40-41页 |
| 3.2.1 突变体对底物硫代乙酰胆碱(ATC)的动力学实验结果 | 第40-41页 |
| 3.3 四种常见的有机磷农药对丁酰胆碱酯酶及其突变体的抑制 | 第41-54页 |
| 3.3.1 乙酰胆碱酯酶对四种有机磷的k_i的测定 | 第42-45页 |
| 3.3.2 丁酰胆碱酯酶对四种有机磷的k_i的测定 | 第45-48页 |
| 3.3.3 各种突变体对四种有机磷的初筛 | 第48-51页 |
| 3.3.4 高亲和性突变体A328W的动力学表征 | 第51-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 研究成果及发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
