| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第13-17页 |
| 1.1 APOBEC3(A3s)基因简介 | 第13页 |
| 1.2 A3s与LINE-1(L1)的关系 | 第13页 |
| 1.3 A3s的致突变机制 | 第13-14页 |
| 1.4 A3s的表达与癌症的发生发展 | 第14-16页 |
| 1.5 研究策略 | 第16-17页 |
| 1.5.1 探究A3s的生物学功能 | 第16页 |
| 1.5.2 A3s发挥作用机制的初步研究 | 第16-17页 |
| 2 实验材料、仪器与试剂配制 | 第17-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和细胞系 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂盒和耗材 | 第17-18页 |
| 2.2 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.3 试剂配制 | 第19-21页 |
| 2.3.1 细菌培养所用试剂配制 | 第19页 |
| 2.3.2 细胞培养所用试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.3.3 其他试剂配制 | 第20页 |
| 2.3.4 WB及IP试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.4 DNA合成和测序 | 第21-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-43页 |
| 3.1 细胞培养 | 第25-26页 |
| 3.2 A3s基因家族的制备 | 第26-29页 |
| 3.2.1 细胞总RNA的获取 | 第26页 |
| 3.2.2 cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 3.2.3 PCR反应 | 第27-28页 |
| 3.2.4 PCR产物与载体的连接 | 第28页 |
| 3.2.5 连接产物转化感受态细胞 | 第28-29页 |
| 3.2.6 重组克隆载体的鉴定 | 第29页 |
| 3.3 A3s基因家族真核重组表达载体构建 | 第29-31页 |
| 3.3.1 PCR反应体系(20μL×2) | 第29-30页 |
| 3.3.2 目的片段与表达载体连接 | 第30页 |
| 3.3.3 重组表达载体的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.4 A3C RNA干扰重组表达载体的构建 | 第31页 |
| 3.5 A3s表达鉴定 | 第31-36页 |
| 3.5.1 A3s重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 3.5.2 A3s重组质粒的转染 | 第32-33页 |
| 3.5.3 A3s转录水平的鉴定 | 第33页 |
| 3.5.4 A3s蛋白水平的鉴定 | 第33-36页 |
| 3.6 A3s蛋白家族生物学功能试验 | 第36-38页 |
| 3.6.1 A3s蛋白家族对HEK293细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.6.2 A3s蛋白家族对HEK293细胞凋亡的影响 | 第37页 |
| 3.6.3 A3s蛋白家族对HEK293细胞周期的影响 | 第37-38页 |
| 3.7 A3s蛋白家族与LINE1 ORF-1P(L1 ORF-1P)的互作分析 | 第38-39页 |
| 3.7.1 A3s蛋白与L1 ORF-1p蛋白的相互作用 | 第38-39页 |
| 3.7.2 RNA在A3s与LI ORF-1p互作中的作用 | 第39页 |
| 3.8 A3s对引起癌症相关基因TP53、K-RAS突变的研究 | 第39-41页 |
| 3.8.1 TP53、K-RAS、TP53-P重组表达载体的构建 | 第39页 |
| 3.8.2 TP53、K-RAS重组表达载体在宿主细胞中的表达检测 | 第39页 |
| 3.8.3 3D PCR(Differential DNA Denaturation PCR)实验 | 第39-40页 |
| 3.8.4 A3s对TP53启动子启动能力的影响 | 第40-41页 |
| 3.9 数据统计与分析 | 第41-43页 |
| 4 实验结果 | 第43-71页 |
| 4.1 A3S真核表达载体构建 | 第43-54页 |
| 4.1.1 细胞RNA提取鉴定 | 第43页 |
| 4.1.2 A3s基因家族扩增 | 第43-44页 |
| 4.1.3 重组克隆载体菌液PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 4.1.4 A3s真核表达载体构建 | 第45-53页 |
| 4.1.5 A3s-HA真核表达鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2 A3s的生物学功能 | 第54-58页 |
| 4.2.1 A3s表达促进HEK293细胞增殖 | 第54-55页 |
| 4.2.2 A3s基因对HEK293细胞迁移无明显影响 | 第55-56页 |
| 4.2.3 A3s过表达抑制HEK293细胞凋亡 | 第56-57页 |
| 4.2.4 A3s促进HEK293的细胞周期改变 | 第57-58页 |
| 4.3 A3s介导的细胞调控机制的研究 | 第58-71页 |
| 4.3.1 A3s与L1-ORF1p相互作用探究 | 第58-59页 |
| 4.3.2 A3s家族蛋白与L1ORF-1p的相互作用依赖RNA | 第59-60页 |
| 4.3.3 A3s介导TP53和K-RAS突变的探索 | 第60-71页 |
| 5 结论 | 第71-73页 |
| 5.1 A3s基因的生物学功能 | 第71页 |
| 5.2 A3s介导的调控机制 | 第71-73页 |
| 6 讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 附录A 英文缩略词表 | 第81-83页 |
| 附录B 测序结果 | 第83-97页 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第97-101页 |
| 学位论文数据集 | 第101页 |
