| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 腈类物质及腈转化酶 | 第14页 |
| 1.2 腈水解酶的来源及分类 | 第14-18页 |
| 1.2.1 腈水解酶的来源 | 第15-17页 |
| 1.2.2 腈水解酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.3 腈水解酶的结构和催化机理 | 第18-19页 |
| 1.3.1 腈水解酶的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2 腈水解酶的催化机理 | 第19页 |
| 1.4 腈水解酶的应用 | 第19-24页 |
| 1.4.1 腈水解酶在工业生产中的应用 | 第19-23页 |
| 1.4.2 腈水解酶在其它方面的应用 | 第23-24页 |
| 1.5 腈水解酶的筛选及功能改进策略 | 第24-28页 |
| 1.5.1 腈水解酶的筛选 | 第24-27页 |
| 1.5.2 蛋白质工程 | 第27-28页 |
| 1.6 腈水解酶的固定化技术 | 第28-29页 |
| 1.7 腈水解酶催化工艺条件的优化 | 第29页 |
| 1.8 腈水解酶参与的串联反应 | 第29-30页 |
| 1.9 本研究中所涉及的分子模拟方法简介 | 第30-32页 |
| 1.9.1. 同源建模 | 第30-31页 |
| 1.9.2 分子对接 | 第31-32页 |
| 1.10 本课题的研究内容 | 第32-34页 |
| 1.10.1 本课题的研究背景及意义 | 第32-33页 |
| 1.10.2 本课题的研究内容 | 第33-34页 |
| 第2章 腈水解酶酶库的构建 | 第34-46页 |
| 2.1 前言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 2.2.2 培养基 | 第34-35页 |
| 2.2.3 分子生物学操作试剂盒与工具酶 | 第35页 |
| 2.2.4 主要实验设备 | 第35-36页 |
| 2.2.5 主要试剂及溶液配制方法 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-40页 |
| 2.3.1 腈水解酶基因组数据挖掘 | 第36-37页 |
| 2.3.2 基因组DNA的抽提 | 第37页 |
| 2.3.3 腈水解酶的基因克隆 | 第37-38页 |
| 2.3.4 腈水解酶的重组表达 | 第38页 |
| 2.3.5 腈水解酶的酶活鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 腈水解酶的分离纯化及除盐 | 第39页 |
| 2.3.7 分析方法 | 第39-40页 |
| 2.4. 结果与讨论 | 第40-45页 |
| 2.4.1 腈水解酶基因的筛选 | 第40-43页 |
| 2.4.2 腈水解酶基因的克隆及酶活检测 | 第43-44页 |
| 2.4.3 腈水解酶基因的纯化及浓缩 | 第44-45页 |
| 2.5. 本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 高对映体选择性邻氯扁桃酸腈水解酶的筛选及其酶学性质研究 | 第46-58页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 主要实验设备 | 第46-47页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.3.1 以邻氯扁桃腈为底物对酶库的筛选 | 第47页 |
| 3.3.2 重组腈水解酶GPnor51的酶学性质研究 | 第47-48页 |
| 3.3.3 分析方法 | 第48-51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-57页 |
| 3.4.1 以邻氯扁桃腈为底物的酶库筛选 | 第51页 |
| 3.4.2 重组腈水解酶GPnor51的酶学性质研究 | 第51-57页 |
| 3.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第4章 腈水解酶GPNOR51在(R)-(-)-邻氯扁桃酸生产中的研究 | 第58-66页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 主要实验设备 | 第58页 |
| 4.2.2 主要试剂及溶液配制方法 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.3.1 水溶性有机溶剂对腈水解酶GPnor51的影响 | 第59页 |
| 4.3.2 底物浓度对腈水解酶GPnor51酶活的影响 | 第59页 |
| 4.3.3 水不溶性有机溶剂对腈水解酶GPnor51的影响 | 第59页 |
| 4.3.4 两相体系中底物浓度对腈水解酶GPnor51的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.5 固定化腈水解酶GPnor51在生产(R)-(-)-邻氯扁桃酸中的研究 | 第60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-65页 |
| 4.4.1 水溶性有机溶剂对腈水解酶GPnor51酶活及对映体选择性的影响 | 第60-62页 |
| 4.4.2 底物浓度对腈水解酶GPnor51酶活的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.3 水不溶性有机溶剂对腈水解酶GPnor51的影响 | 第63页 |
| 4.4.4 两相体系中底物浓度对腈水解酶GPnor51的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.5 固定化腈水解酶GPnor51在生产(R)-(-)-邻氯扁桃酸中的研究 | 第64-65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第5章 腈水解酶PPL19的筛选及其定向改造 | 第66-76页 |
| 5.1 前言 | 第66页 |
| 5.2 实验材料 | 第66-67页 |
| 5.2.1 自诱导培养基 | 第66页 |
| 5.2.2 定点突变相关试剂盒及工具酶 | 第66-67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 5.3.1 以扁桃腈为底物对酶库的筛选 | 第67页 |
| 5.3.2 重组腈水解酶PpL19的定向改造 | 第67-68页 |
| 5.3.3 分析方法 | 第68-70页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第70-74页 |
| 5.4.1 以扁桃腈为底物的酶库筛选 | 第70页 |
| 5.4.2 腈水解酶PpL19的定向改造 | 第70-74页 |
| 5.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 第6章 腈水解酶PPL19的同源建模及分子对接 | 第76-86页 |
| 6.1 前言 | 第76页 |
| 6.2 实验材料 | 第76页 |
| 6.3 实验方法 | 第76-79页 |
| 6.3.1 腈水解酶PpL19的同源建模 | 第76-78页 |
| 6.3.2 腈水解酶PpL19的分子对接分析 | 第78-79页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第79-84页 |
| 6.4.1 腈水解酶PpL19的同源建模 | 第79-82页 |
| 6.4.2 腈水解酶PpL19的分子对接分析 | 第82-84页 |
| 6.5 本章小结 | 第84-86页 |
| 第7章 结论与展望 | 第86-89页 |
| 7.1 结论 | 第86-88页 |
| 7.1.1 腈水解酶酶库的构建 | 第86页 |
| 7.1.2 重组腈水解酶GPnor51的筛选及其定向改造 | 第86-87页 |
| 7.1.3 重组腈水解酶PpL19的筛选及其在生产(S)-扁桃酸方面的研究 | 第87-88页 |
| 7.2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-104页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 附录 | 第106-119页 |
| 附录Ⅰ | 第106-108页 |
| 附录Ⅱ | 第108-110页 |
| 附录Ⅲ | 第110-119页 |
