| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-23页 |
| 1 梨果实石细胞与果实品质的关系 | 第17页 |
| 2 石细胞的形成与木质素代谢 | 第17-19页 |
| 3 影响石细胞形成的生理因素 | 第19页 |
| 4 木质素代谢相关酶与基因的研究进展 | 第19-23页 |
| 第二章 不同梨品种果肉石细胞含量研究 | 第23-29页 |
| 1 材料和方法 | 第23-24页 |
| 1.1 材料 | 第23页 |
| 1.2 方法 | 第23-24页 |
| 1.2.1 石细胞含量的测定 | 第23-24页 |
| 1.2.2 木质素含量的测定 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 套袋对'砀山酥梨'果实石细胞形成及相关代谢酶的影响 | 第29-41页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-32页 |
| 1.2.1 单果重的测定 | 第30页 |
| 1.2.2 石细胞含量的测定 | 第30页 |
| 1.2.3 木质素含量的测定 | 第30页 |
| 1.2.4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取与活性的测定 | 第30-31页 |
| 1.2.5 肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)的提取与活性的测定 | 第31页 |
| 1.2.6 肉桂醇脱氢酶(CAD)的提取与活性的测定 | 第31-32页 |
| 1.2.7 过氧化物酶(POD)的提取 | 第32页 |
| 1.2.8 过氧化物酶活力的测定 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.1 套袋对发育过程'砀山酥梨'果实单果重的影响 | 第32-33页 |
| 2.2 套袋对'砀山酥梨'果实发育过程中石细胞、木质素及石细胞中木质素含量的影响 | 第33-35页 |
| 2.2.1 '砀山酥梨'果实发育过程中石细胞含量的变化 | 第33-34页 |
| 2.2.2 '砀山酥梨'果实发育过程中木质素含量的变化 | 第34-35页 |
| 2.2.3 '砀山酥梨'果实发育过程中石细胞中木质素含量的变化 | 第35页 |
| 2.3 套袋对'砀山酥梨'果实发育过程中木质素代谢相关酶活性的影响 | 第35-38页 |
| 2.3.1 '砀山酥梨'果实发育过程中PAL活性的变化 | 第35-36页 |
| 2.3.2 '砀山酥梨'果实发育过程中C4H活性的变化 | 第36页 |
| 2.3.3 '砀山酥梨'果实发育过程中CAD活性的变化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 '砀山酥梨'果实发育过程中POD活性的变化 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-41页 |
| 第四章 套袋对'砀山酥梨’果实中木质素代谢相关基因的时空表达分析 | 第41-53页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1 材料 | 第42页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 1.1.2 试剂 | 第42页 |
| 1.2 方法 | 第42-45页 |
| 1.2.1 果实不同发育时期果肉RNA的提取和DNA的消化 | 第42-43页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第43页 |
| 1.2.3 荧光定量PCR | 第43-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-53页 |
| 2.1 套袋对'砀山酥梨'果实生长发育过程中木质素代谢相关酶基因表达的影响 | 第45-51页 |
| 2.1.1 '砀山酥梨'果实发育过程中PAL相对表达量的变化 | 第45页 |
| 2.1.2 '砀山酥梨'果实发育过程中C4H相对表达量的变化 | 第45-46页 |
| 2.1.3 '砀山酥梨'果实发育过程中4CL相对表达量的变化 | 第46-47页 |
| 2.1.4 '砀山酥梨'果实发育过程中CAD相对表达量的变化 | 第47-48页 |
| 2.1.5 '砀山酥梨'果实发育过程中HCT相对表达量的变化 | 第48-49页 |
| 2.1.6 '砀山酥梨'果实发育过程中C3'H相对表达量的变化 | 第49页 |
| 2.1.7 '砀山酥梨'果实发育过程中CCoAOMT相对表达量的变化 | 第49-50页 |
| 2.1.8 '砀山酥梨'果实发育过程中POD相对表达量的变化 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 梨果实中PAL、C4H、C3'H、HCT、CCoAOMT、POD基因的克隆及分析 | 第53-97页 |
| 第一节 梨果实中PAL基因的克隆及序列分析 | 第54-63页 |
| 1 材料和方法 | 第54-56页 |
| 1.1 材料 | 第54页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第54页 |
| 1.1.2 菌种及试剂 | 第54页 |
| 1.2 方法 | 第54-56页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第54-55页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第55页 |
| 1.2.3 梨果实中苯丙氨酸解氨酶基因的的RT-PCR扩增 | 第55页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第55页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第55-56页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-61页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中PAL基因cDNA的克隆 | 第56-57页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第57页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第57-58页 |
| 2.4 PAL编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第58页 |
| 2.5 PAL编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 第二节 梨果实中C4H基因的克隆及序列分析 | 第63-70页 |
| 1 材料和方法 | 第63-64页 |
| 1.1 材料 | 第63页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第63页 |
| 1.1.2 菌种及试剂 | 第63页 |
| 1.2 方法 | 第63-64页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第63页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第63页 |
| 1.2.3 梨果实中肉桂酸4-羟基化酶基因的的RT-PCR扩增 | 第63-64页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第64页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第64页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-68页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中C4H基因cDNA的克隆 | 第64-65页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第65页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第65页 |
| 2.4 C4H编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第65页 |
| 2.5 C4H编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第65-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第三节 梨果实中C3'H基因的克隆及序列分析 | 第70-77页 |
| 1 材料和方法 | 第70-71页 |
| 1.1 材料 | 第70页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第70页 |
| 1.1.2 菌种及试剂 | 第70页 |
| 1.2 方法 | 第70-71页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第70页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第70页 |
| 1.2.3 梨果实中p-香豆酰-莽草酸/奎尼酸3'-羟化酶基因的的RT-PCR扩增 | 第70-71页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第71页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第71页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-76页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中C3'H基因cDNA的克隆 | 第71-72页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第72页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第72页 |
| 2.4 C3'H编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第72页 |
| 2.5 C3'H编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第72-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 第四节 梨果实中HCT基因的克隆及序列分析 | 第77-83页 |
| 1 材料和方法 | 第77-78页 |
| 1.1 材料 | 第77页 |
| 1.2 方法 | 第77-78页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第77页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第77-78页 |
| 1.2.3 梨果实中羟基肉桂酰基转移酶基因的的RT-PCR扩增 | 第78页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第78页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第78页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-82页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中HCT基因cDNA的克隆 | 第78-79页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第79页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第79页 |
| 2.4 HCT编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第79-80页 |
| 2.5 HCT编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 第五节 梨果实中CCoAOMT基因的克隆及序列分析 | 第83-89页 |
| 1 材料和方法 | 第83-84页 |
| 1.1 材料 | 第83页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第83页 |
| 1.1.2 菌种及试剂 | 第83页 |
| 1.2 方法 | 第83-84页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第83页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第83页 |
| 1.2.3 梨果实中咖啡酰-辅酶AO-甲基转移酶基因的的RT-PCR扩增 | 第83-84页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第84页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第84页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-88页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中CCoAOMT基因cDNA的克隆 | 第84-85页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第85页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第85页 |
| 2.4 CCoAOMT编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第85-86页 |
| 2.5 CCoAOMT编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第86-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 第六节 梨果实中POD基因的克隆及序列分析 | 第89-97页 |
| 1 材料和方法 | 第89-90页 |
| 1.1 材料 | 第89页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第89页 |
| 1.1.2 菌种及试剂 | 第89页 |
| 1.2 方法 | 第89-90页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第89页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第89-90页 |
| 1.2.3 梨果实中过氧化物酶基因的的RT-PCR扩增 | 第90页 |
| 1.2.4 扩增片段的回收与连接 | 第90页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第90页 |
| 1.2.6 序列比对分析 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-95页 |
| 2.1 '砀山酥梨'果实中POD基因cDNA的克隆 | 第90-91页 |
| 2.2 蛋白质序列分析 | 第91-92页 |
| 2.3 分子进化分析 | 第92页 |
| 2.4 POD编码蛋白质的跨膜结构域、疏水性和信号肽序列预测和分析 | 第92页 |
| 2.5 POD编码蛋白质的二级结构与三级结构预测和分析 | 第92-95页 |
| 3 讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 梨果实C4H、POD和CCoAOMT基因的亚细胞定位分析 | 第97-111页 |
| 第一节 梨果实C4H基因的亚细胞定位分析 | 第98-104页 |
| 1 材料和方法 | 第98-102页 |
| 1.1 材料 | 第98-99页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第98页 |
| 1.1.2 试剂、菌株及载体 | 第98页 |
| 1.1.3 培养基的准备 | 第98-99页 |
| 1.2 方法 | 第99-102页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第99页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第99页 |
| 1.2.3 引物设计 | 第99页 |
| 1.2.4 克隆 | 第99页 |
| 1.2.5 质粒的提取 | 第99-100页 |
| 1.2.6 表达载体的构建 | 第100页 |
| 1.2.7 农杆菌感受态细胞的制备 | 第100-101页 |
| 1.2.8 农杆菌感受态细胞的转化 | 第101页 |
| 1.2.9 农杆菌侵染洋葱表皮及样品观察 | 第101-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-103页 |
| 3 讨论 | 第103-104页 |
| 第二节 梨果实POD基因的亚细胞定位分析 | 第104-108页 |
| 1 材料和方法 | 第104-106页 |
| 1.1 材料 | 第104页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第104页 |
| 1.1.2 试剂、菌株及载体 | 第104页 |
| 1.1.3 培养基的准备 | 第104页 |
| 1.2 方法 | 第104-106页 |
| 1.2.1 RNA的提取和DNA的消化 | 第104页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第104-105页 |
| 1.2.3 引物设计 | 第105页 |
| 1.2.4 克隆 | 第105页 |
| 1.2.5 质粒的提取 | 第105页 |
| 1.2.6 表达载体的构建 | 第105-106页 |
| 1.2.7 农杆菌感受态细胞的转化 | 第106页 |
| 1.2.8 农杆菌侵染洋葱表皮及样品观察 | 第106页 |
| 2 结果与分析 | 第106-107页 |
| 3 讨论 | 第107-108页 |
| 第三节 梨果实CCoAOMT基因的亚细胞定位分析 | 第108-111页 |
| 1 材料和方法 | 第108-110页 |
| 1.1 材料 | 第108页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第108页 |
| 1.1.2 试剂、菌株及载体 | 第108页 |
| 1.1.3 培养基的准备 | 第108页 |
| 1.2 方法 | 第108-110页 |
| 1.2.1 总RNA的提取和DNA的消化 | 第108-109页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第109页 |
| 1.2.3 pBI121-CCoAOMT-GFP植物表达载体的构建的技术路线技术路线 | 第109页 |
| 1.2.4 农杆菌感受态细胞的转化 | 第109页 |
| 1.2.5 农杆菌侵染洋葱表皮及样品观察 | 第109-110页 |
| 2 结果与分析 | 第110页 |
| 3 讨论 | 第110-111页 |
| 全文结论 | 第111-113页 |
| 创新点 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 攻读硕士期间发表(待发表)论文情况 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
