| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 糖尿病及其发病机制 | 第13-14页 |
| 1.1.1 糖尿病简介 | 第13页 |
| 1.1.2 糖尿病的发病机制 | 第13-14页 |
| 1.2 GLP-1 药物的作用 | 第14-18页 |
| 1.2.1 GLP-1 的分泌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 GLP-1 的空间结构 | 第15页 |
| 1.2.3 GLP-1 的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.2.4 GLP-1 作用的分子机理 | 第16-18页 |
| 1.3 CHO表达系统 | 第18-20页 |
| 1.3.1 CHO表达系统简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 CHO细胞高表达策略 | 第19-20页 |
| 1.4 本文研究背景和内容 | 第20-23页 |
| 1.4.1 本文研究背景 | 第20页 |
| 1.4.2 本文研究的内容 | 第20-23页 |
| 第二章 GLP-1 类似物突变体设计及检测模型的建立 | 第23-35页 |
| 2.1 前言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.3.1 培养基 | 第25页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第25页 |
| 2.3.3 细胞模型的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.4 细胞模型的筛选 | 第26页 |
| 2.3.5 细胞模型的流式细胞仪检测 | 第26页 |
| 2.3.6 细胞模型的激光共聚焦检测 | 第26页 |
| 2.3.7 细胞模型的RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.3.8 GLP-1 突变体的设计与合成 | 第27页 |
| 2.3.9 GLP-1 类似物在构建细胞模型的活性检测 | 第27页 |
| 2.3.10 GLP-1 类似物在野生模型的活性检测 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 2.4.1 重组质粒pc DNA3.1/h GLP-1R的构建 | 第28页 |
| 2.4.2 细胞模型的筛选 | 第28-29页 |
| 2.4.3 细胞模型的验证 | 第29-31页 |
| 2.4.4 细胞模型的功能检测 | 第31-32页 |
| 2.4.5 GLP-1 突变体的活性检测 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-35页 |
| 第三章 提高融合蛋白的比活性与N端稳定性的设计与改造 | 第35-62页 |
| 3.1 前言 | 第35-37页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第37-39页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.3.1 培养基 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组菌株（P.Pastoris/p GAPZα）构建与蛋白制备 | 第40-42页 |
| 3.3.3 重组菌株（P.Pastoris/p PIC9K）构建与蛋白制备 | 第42-43页 |
| 3.3.4 融合蛋白在细胞模型的活性检测 | 第43-44页 |
| 3.3.5 融合蛋白在野生细胞的活性检测 | 第44页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第44-60页 |
| 3.4.1 GAP启动子与信号肽酶改造 | 第44-52页 |
| 3.4.2 新颖表达框架与串联体数优化 | 第52-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 GLP-1 类似物与HSA融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 | 第62-83页 |
| 4.1 前言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第62-64页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第63-64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-69页 |
| 4.3.1 培养基 | 第64页 |
| 4.3.2 中国卵巢仓鼠细胞（CHO）的培养 | 第64-65页 |
| 4.3.3 表达质粒的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.4 CHO重组细胞的电转构建 | 第66页 |
| 4.3.5 重组细胞的筛选 | 第66-67页 |
| 4.3.6 表达产物的验证 | 第67页 |
| 4.3.7 重组细胞的悬浮驯化 | 第67页 |
| 4.3.8 重组细胞的批次实验 | 第67页 |
| 4.3.9 重组细胞的稳定性验证 | 第67-68页 |
| 4.3.10 摇瓶流加实验 | 第68页 |
| 4.3.11 发酵罐实验 | 第68页 |
| 4.3.12 重组蛋白的分离纯化 | 第68页 |
| 4.3.13 重组蛋白的活性检测 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第69-82页 |
| 4.4.1 CHO表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| 4.4.2 CHO重组细胞的构建与筛选 | 第70-73页 |
| 4.4.3 重组细胞的验证 | 第73页 |
| 4.4.4 CHO重组细胞悬浮驯化 | 第73-74页 |
| 4.4.5 CHO重组细胞的批次实验 | 第74-75页 |
| 4.4.6 重组细胞的稳定性验证 | 第75页 |
| 4.4.7 CHO重组细胞的 3 L流加瓶流加发酵 | 第75-76页 |
| 4.4.8 重组蛋白的分离纯化 | 第76-81页 |
| 4.4.9 重组蛋白的活性检测 | 第81-82页 |
| 4.5 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 GLP-1 类似物的质量检测与定向分化的活性评价 | 第83-98页 |
| 5.1 前言 | 第83页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第83-84页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第84页 |
| 5.3 实验方法 | 第84-87页 |
| 5.3.1 样品的质量检测 | 第84-86页 |
| 5.3.2 融合蛋白的促增殖作用和定向分化作用 | 第86-87页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第87-96页 |
| 5.4.1 GGH的原料药质量检测 | 第87-93页 |
| 5.4.2 融合蛋白的促增殖作用和定向分化作用 | 第93-96页 |
| 5.5 小结 | 第96-98页 |
| 主要结论与展望 | 第98-101页 |
| 主要结论 | 第98-99页 |
| 展望 | 第99-101页 |
| 论文主要创新点 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-112页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第112页 |
