| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1 巨细胞病毒 | 第12-15页 |
| 1.1 巨细胞病毒的基本特征 | 第12-13页 |
| 1.2 巨细胞病毒的感染及危害 | 第13-15页 |
| 2 巨细胞病毒疫苗 | 第15-18页 |
| 2.1 巨细胞病毒疫苗的现状 | 第15页 |
| 2.2 巨细胞病毒疫苗的种类 | 第15-18页 |
| 3 免疫佐剂 | 第18-22页 |
| 3.1 免疫佐剂及其种类 | 第18-20页 |
| 3.2 IL-12,IL-18,HMGB1作为佐剂的生物学特征 | 第20-22页 |
| 第二章 巨细胞病毒M84核酸疫苗辅以分子佐剂HMBG1与IL-18免疫效力的研究 | 第22-46页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1 质粒载体、菌株、病毒、细胞以及动物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验所需的主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 实验所用的主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.4 实验所用的主要溶液 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-34页 |
| 3.1 模板的获取 | 第25-27页 |
| 3.2 引物 | 第27页 |
| 3.3 PCR体系与反应条件 | 第27-28页 |
| 3.4 电转化感受态的制备 | 第28页 |
| 3.5 PCR产物纯化和回收 | 第28-29页 |
| 3.6 PCR产物与载体的连接 | 第29页 |
| 3.7 连接产物的纯化与转化 | 第29-30页 |
| 3.8 单克隆的挑取与质粒的小量提取 | 第30-31页 |
| 3.9 酶切鉴定与测序鉴定 | 第31页 |
| 3.10 质粒的大量提取 | 第31-32页 |
| 3.11 DNA浓度和纯度的测量 | 第32页 |
| 3.12 小鼠免疫 | 第32-33页 |
| 3.13 病毒攻毒 | 第33页 |
| 3.14 小鼠器官的获取和病毒滴度的测定 | 第33-34页 |
| 3.15 统计学分析 | 第34页 |
| 4 实验结果 | 第34-43页 |
| 4.1 鼠HMGB1和IL-18 DNA片段的扩增产物 | 第34-35页 |
| 4.2 重组鼠HMGB1与IL-18的鉴定 | 第35-36页 |
| 4.3 鼠HMGB1和IL-18的序列测定 | 第36-37页 |
| 4.4 HMGB1和IL-18作为巨细胞病毒M84核酸疫苗佐剂效果的评价 | 第37-43页 |
| 5 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 巨细胞病毒IE_1核酸疫苗辅以分子佐剂IL-12在正常小鼠以及糖尿病小鼠中免疫效力的研究 | 第46-62页 |
| 1 引言 | 第46-47页 |
| 2 实验材料 | 第47-48页 |
| 2.1 质粒载体、菌株、病毒、细胞以及动物 | 第47页 |
| 2.2 实验所需的主要试剂 | 第47-48页 |
| 2.3 实验所用的主要仪器设备 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.1 构建糖尿病模型 | 第48-49页 |
| 3.2 免疫策略 | 第49页 |
| 3.3 病毒攻毒 | 第49-50页 |
| 3.4 酶联免疫斑点(Elispot)法检测细胞因子 | 第50-51页 |
| 3.5 小鼠器官的获取和病毒滴度的测定 | 第51-52页 |
| 3.6 统计学分析 | 第52页 |
| 4 实验结果 | 第52-58页 |
| 4.1 糖尿病模型的建立 | 第52页 |
| 4.2 IE_1单独或联合佐剂IL-12免疫健康小鼠以及糖尿病小鼠攻毒后的保护效果 | 第52-56页 |
| 4.3 攻毒后5天,21天小鼠脾脏和唾液腺中病毒量的测定 | 第56-57页 |
| 4.4 各免疫组的细胞应答水平 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-62页 |
| 结语 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 缩写表 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
