| 摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第17-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-47页 |
| 第一章 猪流行性腹泻病毒的研究进展 | 第19-33页 |
| 1 病毒的基本特征 | 第19-20页 |
| 2 非结构蛋白和功能 | 第20-22页 |
| 2.1 非结构蛋白Nsp1 | 第20页 |
| 2.2 非结构蛋白Nsp2 | 第20-21页 |
| 2.3 非结构蛋白Nsp3 | 第21页 |
| 2.4 非结构蛋白Nsp4,Nsp5和Nsp6 | 第21页 |
| 2.5 非结构蛋白Nsp7, Nsp8, Nsp9, Nsp10和Nsp11 | 第21页 |
| 2.6 非结构蛋白Nsp12, Nsp13, Nsp14, Nsp15和Nsp16 | 第21页 |
| 2.7 ORF3 | 第21-22页 |
| 3 结构蛋白的结构和功能 | 第22-23页 |
| 3.1 纤突蛋白spike(S蛋白) | 第22页 |
| 3.2 糖基化膜蛋白(M蛋白) | 第22-23页 |
| 3.3 小包膜糖蛋白(E蛋白) | 第23页 |
| 3.4 核衣壳蛋白(Nprotein) | 第23页 |
| 4 PED流行病学研究进展 | 第23-25页 |
| 4.1 国外流行情况 | 第24页 |
| 4.2 国内流行情况 | 第24-25页 |
| 5 PED的诊断 | 第25-26页 |
| 5.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第25页 |
| 5.2 分子生物学检测 | 第25-26页 |
| 6 PED的预防及治疗 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 PEDV吸附受体和HMGB1的相关研究进展 | 第33-47页 |
| 1 PEDV吸附受体的研究 | 第33页 |
| 2 HMGB1的研究进展 | 第33-43页 |
| 2.1 高迁移率族蛋白家族 | 第34页 |
| 2.2 HMGB1的结构和功能 | 第34-36页 |
| 2.3 HMGB1的释放 | 第36-38页 |
| 2.4 HMGB1的受体与信号转导 | 第38-39页 |
| 2.5 HMGB1的氧化还原 | 第39-40页 |
| 2.6 HMGB1在病毒性疾病中的作用 | 第40-41页 |
| 2.7 HMGB1的抑制剂 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 第二篇 研究部分 | 第47-153页 |
| 第三章 甘草素对PEDV的抗病毒效果 | 第47-67页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第47-48页 |
| 1.2 试剂 | 第48页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第48页 |
| 1.4 常用溶液 | 第48-49页 |
| 2 试验方法 | 第49-58页 |
| 2.1 细胞的复苏、培养、传代和冻存 | 第50页 |
| 2.2 病毒的培养 | 第50页 |
| 2.3 病毒滴度的测定 | 第50页 |
| 2.4 Western blot分析 | 第50-53页 |
| 2.5 荧光定量PCR | 第53-55页 |
| 2.6 甘草素对Vero细胞毒性的测定 | 第55页 |
| 2.7 western blot试验分析甘草素对PEDV感染的影响 | 第55-56页 |
| 2.8 荧光定量PCR分析甘草素(GLY)对PEDV感染的影响 | 第56页 |
| 2.9 噬斑形成试验分析甘草素(GLY)对PEDV感染的影响 | 第56页 |
| 2.10 甘草素(GLY)对PEDV入胞和复制的影响 | 第56-57页 |
| 2.11 甘草素对PEDV组装和释放的影响 | 第57页 |
| 2.12 甘草素对病毒粒子的影响 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-64页 |
| 3.1 甘草素对Vero细胞毒性的影响 | 第58-59页 |
| 3.2 甘草素对PEDV的抗病毒效果 | 第59-61页 |
| 3.3 甘草素对PEDV入胞和复制的影响 | 第61-62页 |
| 3.4 甘草素对PEDV组装和释放的影响 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第四章 HMGB1在甘草素的抗病毒过程中起着重要的作用 | 第67-95页 |
| 1 材料 | 第68-69页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第68页 |
| 1.2 试剂 | 第68-69页 |
| 1.3 抗体 | 第69页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第69页 |
| 2 试验方法 | 第69-79页 |
| 3 结果 | 第79-88页 |
| 3.1 甘草素降低PEDV诱导的促炎性因子的增加 | 第79-80页 |
| 3.2 Poly (I:C)对PEDV的影响 | 第80-81页 |
| 3.3 HMGB1在PEDV感染中有重要的作用 | 第81-83页 |
| 3.4 甘草素通过HMGB1/TLR4抑制PEDV感染 | 第83-85页 |
| 3.5 甘草素通过HMGB1/RAGE抑制PEDV感染 | 第85-86页 |
| 3.6 HMGB1通过P38MAPK引起促炎症因子的升高 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 第五章 硫酸类肝素是猪流行性腹泻病毒感染Vero细胞的吸附因子 | 第95-111页 |
| 1 材料 | 第96-97页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第96页 |
| 1.2 试剂 | 第96-97页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第97页 |
| 2 试验方法 | 第97-98页 |
| 2.1 GAGs在PEDV感染中的作用 | 第97页 |
| 2.2 肝素酶Ⅰ对PEDV吸附的影响 | 第97-98页 |
| 2.3 氯酸钠处理细胞 | 第98页 |
| 3 试验结果 | 第98-106页 |
| 3.1 肝素对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染Vero细胞的影响 | 第98-100页 |
| 3.2 肝素酶Ⅰ对PEDV感染Vero细胞的影响 | 第100-101页 |
| 3.3 氯酸钠对PEDV感染Vero细胞的影响 | 第101-103页 |
| 3.4 N-乙酰化O-硫酸化肝素(de-O)对PEDV的影响 | 第103-104页 |
| 3.5 N-去硫酸化肝素(de-N)对PEDV的影响 | 第104-105页 |
| 3.6 肝素对PEDV复制的影响 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-111页 |
| 第六章 PEDV N蛋白通过与C/EBP-β相互作用来正调HMGB1的转录及乙酰化和释放 | 第111-137页 |
| 1 材料 | 第112页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第112页 |
| 1.2 试剂与抗体 | 第112页 |
| 2 试验方法 | 第112-120页 |
| 2.1 HMGB1启动子质粒的构建 | 第112-115页 |
| 2.2 HMGB1启动子上转录因子的突变与转染 | 第115-116页 |
| 2.3 激光共聚焦 | 第116-117页 |
| 2.4 染色体免疫共沉淀(CHIP) | 第117-118页 |
| 2.5 报告基因试验 | 第118-119页 |
| 2.6 免疫共沉淀(Co-IP) | 第119页 |
| 2.7 核质分离 | 第119-120页 |
| 3 结果 | 第120-130页 |
| 3.1 PEDV感染诱导乙酰化HMGB1释放 | 第120-121页 |
| 3.2 乙酰化的HMGB1对于PEDV诱导的HMGB1释放是必需的 | 第121-124页 |
| 3.3 PEDV-N促进HMGB1的释放 | 第124-127页 |
| 3.4 PEDV-N在HMGB1启动子区富集,且C/EBP负责HMGB1的转录 | 第127-129页 |
| 3.5 PEDV-N与C/EBPβ相互作用 | 第129-130页 |
| 4 讨论 | 第130-133页 |
| 参考文献 | 第133-137页 |
| 第七章 猪流行性腹泻病毒通过DNA损伤引起HMGB1的释放 | 第137-153页 |
| 1 材料 | 第138页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第138页 |
| 1.2 主要试剂和抗体 | 第138页 |
| 2 试验方法 | 第138-139页 |
| 2.1 流式细胞术测定胞内ROS的变化 | 第139页 |
| 2.2 间接免疫荧光 | 第139页 |
| 3 结果 | 第139-148页 |
| 3.1 猪流行性腹泻病毒引起DNA损伤 | 第140-141页 |
| 3.2 NU7441 or KU-55933抑制PEDV的感染 | 第141-143页 |
| 3.3 PEDV引起了PARP1激活 | 第143-144页 |
| 3.4 PEDV引起了Vero细胞产生ROS | 第144-146页 |
| 3.5 DNA损伤引起PARP1的激活 | 第146-147页 |
| 3.6 ROS是PARP1和DNA损伤的下游分子 | 第147-148页 |
| 4 讨论 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-153页 |
| 全文总结 | 第153-155页 |
| 科研成果 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
| 附录 | 第159页 |
