| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 松材线虫病 | 第10-11页 |
| 2 苏云金芽孢杆菌的研究进展 | 第11-17页 |
| 2.1 苏云金芽孢杆菌简介 | 第11页 |
| 2.2 杀虫晶体蛋白分类 | 第11-12页 |
| 2.3 Cry蛋白结构与其功能的关系 | 第12-13页 |
| 2.4 Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机理，作用机制 | 第13-14页 |
| 2.5 Bt对线虫作用的研究 | 第14-16页 |
| 2.6 杀线虫晶体蛋白Cry5亚家族的研究 | 第16-17页 |
| 3 松材线虫与伴生细菌 | 第17-19页 |
| 3.1 松材线虫与细菌的伴生现象 | 第17-18页 |
| 3.2 松材线虫伴生细菌种类 | 第18页 |
| 3.3 伴生细菌对松材线虫致病力的作用 | 第18-19页 |
| 3.4 伴生细菌对松材线虫繁殖的影响 | 第19页 |
| 3.5 伴生细菌中的功能基因可能提供给松材线虫 | 第19页 |
| 4 微生物群落多样性的研究方法 | 第19-23页 |
| 4.1 传统的微生物平板培养法 | 第19-20页 |
| 4.2 磷脂脂肪酸PLFAs分析方法 | 第20页 |
| 4.3 rDNA文库构建技术 | 第20页 |
| 4.4 核酸探针杂交技术 | 第20-21页 |
| 4.5 PCR-RFLP技术 | 第21页 |
| 4.6 SSCP技术 | 第21页 |
| 4.7 高通量测序技术 | 第21页 |
| 4.8 PCR-DGGE | 第21-23页 |
| 5 本课题的研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 转cry5Ba3Φ缺失突变体基因灰葡萄孢菌的获得及其对松材线虫生防效果的检测 | 第24-40页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| 1.1 本实验所用菌株及质粒 | 第24页 |
| 1.2 实验所需化学试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要试剂溶液 | 第24页 |
| 1.4 培养基 | 第24-25页 |
| 1.5 本实验所用PCR引物 | 第25页 |
| 1.6 实验仪器设备 | 第25-26页 |
| 1.7 生物信息学分析软件 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.1 基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.3 质粒构建 | 第28页 |
| 2.3.1 目的片段扩增 | 第28页 |
| 2.3.2 载体扩增 | 第28页 |
| 2.3.3 目标DNA片段与克隆载体连接 | 第28页 |
| 2.4 大肠杆菌感受态转化 | 第28-29页 |
| 2.5 农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化 | 第29-30页 |
| 2.5.1 农杆菌感受态细胞制备 | 第29页 |
| 2.5.2 根癌农杆菌冷冻法转化 | 第29页 |
| 2.5.3 农杆菌转化子介导灰葡萄孢菌转化 | 第29-30页 |
| 2.6 生测实验 | 第30页 |
| 2.7 数据分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-39页 |
| 3.1 Cry5Ba3Φ毒蛋白结构域分析 | 第30-31页 |
| 3.2 载体构建 | 第31-35页 |
| 3.2.1 目的片段扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.2 扩增载体 | 第32-33页 |
| 3.2.3 目的片段与载体连接 | 第33页 |
| 3.2.4 重组子质粒抽提 | 第33-34页 |
| 3.2.5 PCR扩增验证 | 第34-35页 |
| 3.3 cry5Ba3Φ基因缺失突变体质粒导入灰葡萄孢菌 | 第35-38页 |
| 3.3.1 各突变株重组子质粒抽提 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组子质粒转化根癌农杆菌AGL-1 | 第36-37页 |
| 3.3.3 根癌农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化 | 第37页 |
| 3.3.4 小量提取每个转化子的基因组DNA做PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 生测实验结果 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 松材线虫伴生细菌对转cry5Ba3Φ基因灰葡萄孢菌的毒力影响 | 第40-58页 |
| 1 材料 | 第40-43页 |
| 1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 主要试剂溶液 | 第40-41页 |
| 1.4 培养基 | 第41-42页 |
| 1.5 实验仪器设备 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-47页 |
| 2.1 生测实验 | 第43页 |
| 2.2 线虫连续转板培养及收集 | 第43页 |
| 2.3 线虫分离 | 第43页 |
| 2.4 线虫总基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.5 总细菌的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 2.6 变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析 | 第45-46页 |
| 2.6.1 配制聚丙烯酰胺变性梯度胶 | 第45页 |
| 2.6.2 制胶装置的安装 | 第45页 |
| 2.6.3 注胶 | 第45页 |
| 2.6.4 电泳 | 第45页 |
| 2.6.5 目标条带的割胶回收 | 第45-46页 |
| 2.7 目标DNA片段的纯化 | 第46页 |
| 2.8 目标DNA片段的克隆 | 第46-47页 |
| 2.8.1 感受态细胞制备 | 第46页 |
| 2.8.2 目标DNA片段与克隆载体连接 | 第46-47页 |
| 2.8.3 重组质粒的转化与阳性克隆的筛选 | 第47页 |
| 2.9 图像处理与数据分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-57页 |
| 3.1 转cry5Ba3Φ基因灰葡萄孢菌对松材线虫的生防效果测定 | 第47-49页 |
| 3.2 松材线虫连续转板培养 | 第49-50页 |
| 3.3 线虫伴生细菌群落结构分析 | 第50-57页 |
| 4 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第58-61页 |
| 1 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 2 下一步工作计划 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 作者介绍 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
