| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 1. 材料与方法 | 第13-30页 |
| 1.1 实验主要试剂 | 第13-14页 |
| 1.2 实验主要仪器 | 第14-15页 |
| 1.3 菌株、抗体和载体 | 第15页 |
| 1.4 实验动物 | 第15页 |
| 1.5 主要溶液的配置 | 第15-16页 |
| 1.6 组织 RNA 的提取及 CDNA 合成 | 第16-17页 |
| 1.7 TAC1 与 TCTE3 的引物设计及其扩增 | 第17-18页 |
| 1.7.1 引物的设计 | 第17页 |
| 1.7.2 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR） | 第17-18页 |
| 1.7.3 电泳鉴定 | 第18页 |
| 1.8 PCR 产物回收纯化（AXYGENE DNA 凝胶回收试剂盒） | 第18-19页 |
| 1.9 TA 克隆以及其连接产物的转化与筛选 | 第19页 |
| 1.9.1 TA 克隆（Invitrogen TA 克隆试剂盒） | 第19页 |
| 1.9.2 连接产物的转化 | 第19页 |
| 1.9.3 蓝白斑筛选 | 第19页 |
| 1.10 质粒小量提取（AXYGENE 质粒小提试剂盒） | 第19-20页 |
| 1.11 TAC1/PCR2.1 和 TCTE3/PCR2.1 TA 克隆重组质粒的鉴定 | 第20页 |
| 1.11.1 限制性内切酶双酶切鉴定 | 第20页 |
| 1.11.2 DNA 测序 | 第20页 |
| 1.12 重组质粒 TAC1/PGADT7、TAC1/PEGFP-N2、TCTE3/PGADT7 与TCTE3/PEGFP-N2 的构建 | 第20-22页 |
| 1.12.1 重组质粒及载体的酶切 | 第20-21页 |
| 1.12.2 目的片段和载体回收纯化 | 第21页 |
| 1.12.3 目的片段 Tac1、Tcte3 和载体 pGADT7、pEGFP-N2 的连接 | 第21-22页 |
| 1.13 重组质粒 TAC1/PGADT7、TAC1/PEGFP-N2、TCTE3/PGADT7 与TCTE3/PEGFP-N2 的鉴定 | 第22-23页 |
| 1.13.1 双酶切鉴定 | 第22页 |
| 1.13.2 DNA 测序 | 第22-23页 |
| 1.14 重组质粒 TAC1/PEGFP-N2、TCTE3/PEGFP-N2 转染 CHO 细胞、COS-1 细胞 | 第23-24页 |
| 1.14.1 CHO 细胞与 COS-1 细胞的培养 | 第23页 |
| 1.14.2 重组质粒转染 CHO、COS-1 细胞（GEMINI 转染试剂盒） | 第23-24页 |
| 1.15 CHO 细胞的免疫荧光染色 | 第24-25页 |
| 1.15.1 转入 Tac1/pEGFP-N2、Tcte3/pEGFP-N2 的 CHO 细胞染色片的制作 | 第24页 |
| 1.15.2 转入 Tac1/pEGFP-N2＋SPAG6、Tcte3/pEGFP-N2+SPAG6 以及 SPAG6 的CHO 细胞的免疫荧光染色 | 第24-25页 |
| 1.16 COS-1 细胞融合蛋白收集提取 | 第25页 |
| 1.16.1 Tac1/pEGFP-N2、Tcte3/pEGFP-N2 融合蛋白的提取 | 第25页 |
| 1.16.2 融合蛋白浓度的测定（BCA 蛋白浓度测定试剂盒） | 第25页 |
| 1.17 WESTERN BLOT 鉴定 | 第25-27页 |
| 1.17.1 制胶 | 第25-26页 |
| 1.17.2 蛋白样品的准备 | 第26页 |
| 1.17.3 SDS-PAGE 电泳 | 第26页 |
| 1.17.4 转膜（半干转膜法） | 第26-27页 |
| 1.17.5 封闭 | 第27页 |
| 1.17.6 孵一抗 | 第27页 |
| 1.17.7 孵二抗 | 第27页 |
| 1.17.8 ECL 显色 | 第27页 |
| 1.17.9 暗室曝光 | 第27页 |
| 1.18 酵母双杂交实验（CLONTECH 酵母双杂交试剂盒） | 第27-28页 |
| 1.19 YEAST 蛋白的提取（参考 CLONTECH 酵母双杂交手册） | 第28-29页 |
| 1.20 WESTERN BLOT 鉴定 YEAST 蛋白 | 第29-30页 |
| 1.20.1 胶的制备，样品准备，SDS-PAGE 电泳，转膜，封闭(见方法 1.Western blot 步骤) | 第29页 |
| 1.20.2 孵一抗 | 第29页 |
| 1.20.3 孵二抗 | 第29页 |
| 1.20.4 ECL 显色 | 第29页 |
| 1.20.5 暗室曝光 | 第29-30页 |
| 2. 结果 | 第30-40页 |
| 2.1 小鼠 TAC1 和 TCTE3 引物设计 | 第30页 |
| 2.2 提取各组织总 RNA 的结果 | 第30页 |
| 2.3 小鼠 TAC1 和 TCTE3 的 PCR 结果 | 第30-32页 |
| 2.4 TAC1/ PCR2.1 和 TCTE3/ PCR2.1 重组质粒双酶切的鉴定结果 | 第32页 |
| 2.5 TAC1/ PCR2.1 和 TCTE3/ PCR2.1 重组质粒测序结果 | 第32-34页 |
| 2.6 TAC1/PGADT7，TAC1/PEGFP-N2，TCTE3/PGADT7，TCTE3/PEGFP-N2 重组质粒的双酶切的鉴定结果 | 第34-35页 |
| 2.7 TAC1/PGADT7，TAC1/PEGFP-N2，TCTE3/PGADT7，TCTE3/PEGFP-N2 重组质粒测序结果 | 第35页 |
| 2.8 TAC1/PEGFP-N2、TCTE3/PEGFP-N2 和 TAC1/PEGFP-N2＋SPAG6、TCTE3/PEGFP-N2+SPAG6 融合蛋白以及 SPAG6 蛋白在细胞内的定位结果 | 第35-37页 |
| 2.9 TAC1/PEGFP-N2 和 TCTE3/PEGFP-N2 转染 COS-1 细胞后 WESTERN BLOT 的结果 | 第37页 |
| 2.10 TAC1、TCTE3 与 SPAG6 之间 YEAST TWO HYBRID 平板结果 | 第37-39页 |
| 2.11 酵母蛋白的 WESTERN BLOT 检测结果 | 第39-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 4. 结论与展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 综述 | 第49-56页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 附录 1 质粒载体图谱 | 第56-60页 |
| 附录 2 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60-61页 |
| 附录 3 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第61页 |
