| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| 1.1 稻瘟菌与禾谷镰刀菌 | 第14-17页 |
| 1.1.1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第14-15页 |
| 1.1.2 赤霉病和禾谷镰刀菌 | 第15-17页 |
| 1.2 稻瘟菌的侵染循环及生活史 | 第17-19页 |
| 1.2.1 孢子的形成和传播 | 第18页 |
| 1.2.2 附着胞的形成与穿透 | 第18-19页 |
| 1.2.3 侵染型菌丝的分化及在植物细胞的定殖 | 第19页 |
| 1.3 禾谷镰刀菌的生活史 | 第19-20页 |
| 1.4 重要的致病相关通路和基因 | 第20-26页 |
| 1.4.1 cAMP信号通路 | 第21-23页 |
| 1.4.2 Pmk1调控附着胞形成、穿透和侵染型菌丝的生长 | 第23-24页 |
| 1.4.3 Mps1信号通路和钙信号 | 第24-25页 |
| 1.4.4 Osm1信号通路和压力应答 | 第25-26页 |
| 1.5 效应子和无毒基因的研究进展 | 第26-30页 |
| 1.5.1 植物与病原菌的互作 | 第26-27页 |
| 1.5.2 稻瘟菌中效应子和信号转导 | 第27-29页 |
| 1.5.3 禾谷镰刀菌中效应子 | 第29-30页 |
| 1.6 活性氧与氧化还原蛋白的研究进展 | 第30-33页 |
| 1.6.1 活性氧激活MAPK信号通路 | 第30-31页 |
| 1.6.2 硫氧化还原蛋白 | 第31-32页 |
| 1.6.3 谷还原氧化蛋白 | 第32-33页 |
| 第二章 TRX基因预测和生物信息学分析 | 第33-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33页 |
| 2.1.1 TRX基因的预测 | 第33页 |
| 2.1.2 Trx蛋白结构域和活性位点的预测 | 第33页 |
| 2.1.3 TRX基因系统发育树的建立 | 第33页 |
| 2.2 结果 | 第33-35页 |
| 2.2.1 稻瘟菌和禾谷镰刀菌中TRX基因 | 第33-34页 |
| 2.2.2 TRX的系统发育 | 第34-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 稻瘟菌TRX的基因敲除及功能回复验证 | 第36-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-45页 |
| 3.1.1 供试菌株及载体 | 第36页 |
| 3.1.2 稻瘟菌TRX敲除突变体同源重组载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.3 稻瘟菌原生质体的制备和转化 | 第38-40页 |
| 3.1.4 稻瘟菌转化子DNA的小量提取 | 第40-41页 |
| 3.1.5 PCR初步检测鉴定trx缺失突变体 | 第41页 |
| 3.1.6 CTAB法提取稻瘟菌野生型和转化子DNA | 第41-42页 |
| 3.1.7 southern杂交验证trx缺失突变体 | 第42-43页 |
| 3.1.8 trx1 trx2双敲除突变体的获得 | 第43-44页 |
| 3.1.9 互补载体的构建和互补菌株的获得 | 第44-45页 |
| 3.2 结果 | 第45-48页 |
| 3.2.1 trx1，trx2，trx1 trx2突变体的获得 | 第45-47页 |
| 3.2.2 trx1，trx2功能回复验证和亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 trx突变体的表型观察与鉴定 | 第50-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-53页 |
| 4.1.1 菌落形态和生长速率测定 | 第50页 |
| 4.1.2 压力胁迫实验 | 第50页 |
| 4.1.3 产孢率测定及孢子形态观察 | 第50-51页 |
| 4.1.4 附着胞形成实验 | 第51页 |
| 4.1.5 洋葱表皮穿透实验 | 第51页 |
| 4.1.6 大麦和短柄草叶片穿透实验 | 第51页 |
| 4.1.7 水稻喷雾接种实验 | 第51-52页 |
| 4.1.8 大麦针刺接种实验 | 第52页 |
| 4.1.9 qRT-PCR | 第52-53页 |
| 4.2 结果 | 第53-60页 |
| 4.2.1 TRX2缺失影响菌丝生长和对光/暗交替的反应 | 第53-54页 |
| 4.2.2 TRX2缺失影响产孢和孢子形态 | 第54-56页 |
| 4.2.3 TRX2基因在氧化压力和细胞壁压力反应中起重要作用 | 第56-57页 |
| 4.2.4 TRX2缺失影响菌丝头产生附着胞 | 第57页 |
| 4.2.5 trx2和trx1 trx2突变体致病力严重下降 | 第57-59页 |
| 4.2.6 TRX1和TRX2缺失影响穿透和侵染型菌丝的生长 | 第59页 |
| 4.2.7 TRX2在trx1突变体中表达上调 | 第59-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 TRX与Pmk1信号通路的关系 | 第62-72页 |
| 5.1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 5.1.1 稻瘟菌菌丝蛋白质的提取 | 第62-63页 |
| 5.1.2 蛋白质的亲和纯化 | 第63页 |
| 5.1.3 SDS-PAGE电泳 | 第63-64页 |
| 5.1.4 native gel电泳 | 第64-65页 |
| 5.1.5 western blot和磷酸化实验 | 第65-66页 |
| 5.1.6 点突变菌株的获得 | 第66-67页 |
| 5.2 结果 | 第67-70页 |
| 5.2.1 TRX2涉及Pmk1 MAP激酶的激活 | 第67-68页 |
| 5.2.2 TRX2缺失影响Mst7的正常折叠或二聚化 | 第68-69页 |
| 5.2.3 305 位半胱氨酸对Mst7的功能很重要 | 第69-70页 |
| 5.2.4 MS7DA的表达能够部分回复trx1 trx2突变体的表型缺陷 | 第70页 |
| 5.3 讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 禾谷镰刀菌特有分泌蛋白中致病相关基因的筛选 | 第72-80页 |
| 6.1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 6.1.1 供试菌株及载体 | 第72页 |
| 6.1.2 禾谷镰刀菌中特有的分泌蛋白的预测 | 第72页 |
| 6.1.3 Split-PCR构建敲除突变体载体 | 第72-74页 |
| 6.1.4 SU敲除突变体的获得 | 第74页 |
| 6.1.5 菌落形态和生长速率测定 | 第74页 |
| 6.1.6 压力胁迫实验 | 第74-75页 |
| 6.1.7 产孢率测定及孢子形态观察 | 第75页 |
| 6.1.8 有性生殖实验 | 第75页 |
| 6.1.9 小麦穗接种实验 | 第75-76页 |
| 6.1.10 玉米秆接种实验 | 第76页 |
| 6.1.11 玉米须接种实验 | 第76页 |
| 6.2 结果 | 第76-79页 |
| 6.2.1 特有的分泌蛋白基因预测结果 | 第76-77页 |
| 6.2.2 sup1/2/4 突变体接种小麦穗时致病力下降 | 第77-78页 |
| 6.2.3 SUP1缺失影响对玉米的侵染而SUP2和SUP4不影响 | 第78-79页 |
| 6.3 讨论 | 第79-80页 |
| 第七章 Sup2/4 效应蛋白的功能分析和运转机制研究 | 第80-94页 |
| 7.1 材料与方法 | 第80-84页 |
| 7.1.1 供试菌株及载体 | 第80页 |
| 7.1.2 农杆菌GV3101感受态制备和转化 | 第80-81页 |
| 7.1.3 抑制Bax和InF1引发的PCD | 第81页 |
| 7.1.4 基因枪粒子轰击小麦叶片 | 第81-82页 |
| 7.1.5 农杆菌介导的瞬时表达转化实验 | 第82页 |
| 7.1.6 小麦芽鞘接种实验 | 第82-83页 |
| 7.1.7 小麦原生质体的制备和转化 | 第83-84页 |
| 7.2 结果 | 第84-92页 |
| 7.2.1 SUP2和SUP4基因在侵染小麦时期强烈表达 | 第84-85页 |
| 7.2.2 Sup1/2/4 均能抑制Bax和InF1引起的细胞坏死 | 第85-87页 |
| 7.2.3 Sup2和Sup4是真正的分泌蛋白 | 第87-88页 |
| 7.2.4 Sup2和Sup4的信号肽对植物侵染是非常重要的 | 第88-90页 |
| 7.2.5 Sup2和Sup4在侵染点的植物-真菌界面处积累 | 第90-91页 |
| 7.2.6 Sup2和Sup4在烟草中和小麦原生质中的定位 | 第91-92页 |
| 7.3 讨论 | 第92-94页 |
| 第八章 Sup2半胱氨酸的功能研究和寄主互作蛋白的筛选 | 第94-98页 |
| 8.1 材料与方法 | 第94-95页 |
| 8.1.1 供试菌株及载体 | 第94页 |
| 8.1.2 点突变菌株的获得 | 第94页 |
| 8.1.3 酵母双杂筛库 | 第94-95页 |
| 8.2 结果 | 第95-97页 |
| 8.2.1 Cys84 and Cys105对于Sup2的功能和定位是必备的 | 第95-96页 |
| 8.2.2 与Sup2互作的小麦蛋白 | 第96-97页 |
| 8.3 讨论 | 第97-98页 |
| 第九章 全文总结 | 第98-101页 |
| 9.1 上篇：硫氧化还原蛋白（Trx） | 第98-99页 |
| 9.2 下篇：特有分泌蛋白（效应子） | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 附录 | 第110-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 作者简介 | 第117-118页 |
