| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩写词表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-19页 |
| 1.1.1 PSP的来源 | 第13页 |
| 1.1.2 PSP的生物链传递 | 第13-14页 |
| 1.1.3 PSP的化学结构、分类及毒性 | 第14-15页 |
| 1.1.4 PSP的理化性质 | 第15页 |
| 1.1.5 PSP的提取技术 | 第15-16页 |
| 1.1.6 PSP的检测方法 | 第16-19页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第19页 |
| 1.3 研究方法与技术路线 | 第19-21页 |
| 1.3.1 研究方法 | 第19-20页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 GTX2,3 完全抗原的制备及鉴定 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 GTX2,3 完全抗原的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 完全抗原偶联效果的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.3 完全抗原免疫原性的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 BCA法检测完全抗原的蛋白浓度 | 第26页 |
| 2.3.2 GTX2,3 完全抗原全波段紫外扫描鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 免疫抗原GTX2,3-BSA变性SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.4 抗GTX2,3 小鼠免疫血清的效价测定 | 第28-29页 |
| 2.3.5 检测抗原GTX2,3-Gly-KLH最佳包被浓度的确定 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 2.4.1 GTX2,3 与载体蛋白的偶联 | 第29-30页 |
| 2.4.2 完全抗原偶联效果的分析 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 3 GTX2,3 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第33-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 3.1.1 主要仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.2 主要试剂的配制 | 第34-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-45页 |
| 3.2.1 动物免疫 | 第36-37页 |
| 3.2.2 小鼠免疫血清的收集和检测 | 第37-38页 |
| 3.2.3 抗GTX2,3 杂交瘤细胞株的建立 | 第38-42页 |
| 3.2.4 小鼠体内诱生腹水法制备抗GTX2,3 腹水型单克隆抗体 | 第42-43页 |
| 3.2.5 抗GTX2,3 腹水型单克隆抗体的纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.6 抗GTX2,3 腹水型单克隆抗体的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.3.1 4种免疫方案免疫小鼠抗血清的效价测定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 细胞融合及有限稀释法克隆筛选 | 第46-48页 |
| 3.3.3 GTX2,3 细胞上清液抗体效价的测定 | 第48页 |
| 3.3.4 GTX2,3 阳性杂交瘤细胞株细胞上清液单抗亚类的鉴定 | 第48页 |
| 3.3.5 GTX2,3 腹水单抗蛋白浓度及抗体效价测定 | 第48-49页 |
| 3.3.6 GTX2,3 腹水单抗亚类鉴定 | 第49页 |
| 3.3.7 GTX2,3 腹水单抗纯化效果及IgG类蛋白轻、重链分子量的测定 | 第49-50页 |
| 3.3.8 GTX2,3 腹水单抗抗体亲和常数的测定 | 第50页 |
| 3.3.9 GTX2,3 腹水单抗特异性的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-54页 |
| 3.4.1 不同免疫方法的分析 | 第51-52页 |
| 3.4.2 影响细胞融合的主要因素 | 第52-53页 |
| 3.4.3 腹水单抗的纯化 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-56页 |
| 4 GTX2,3 间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第56-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.1.1 主要仪器和试剂 | 第56页 |
| 4.1.2 单克隆抗体 | 第56页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 GTX2,3-KLH与抗GTX2,3 单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第56页 |
| 4.2.2 检测抗原GTX2,3-Gly-KLH最佳包被条件的选择 | 第56-57页 |
| 4.2.3 最佳封闭条件的确定 | 第57页 |
| 4.2.4 最佳封闭时间的选择 | 第57页 |
| 4.2.5 抗GTX2,3 单克隆抗体的最佳反应时间的确定 | 第57页 |
| 4.2.6 GAM-HRP酶标二抗最佳稀释浓度的选择 | 第57页 |
| 4.2.7 GAM-HRP酶标二抗的最佳反应时间的确定 | 第57页 |
| 4.2.8 TMB底物最佳反应时间的选择 | 第57-58页 |
| 4.2.9 膝沟藻毒素GTX2,3 间接竞争ELISA竞争抑制标准曲线的绘制 | 第58页 |
| 4.2.10 GTX2,3间接竞争ELISA 检测限的确定 | 第58页 |
| 4.2.11样品前处理及模拟样品的检测 | 第58-59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 4.3.1 棋盘滴定法确定抗原抗体的最佳工作浓度 | 第59页 |
| 4.3.2 最佳包被条件的选择 | 第59-60页 |
| 4.3.3 最佳封闭条件的确定 | 第60页 |
| 4.3.4 最佳封闭时间的选择 | 第60-61页 |
| 4.3.5 单抗最佳反应时间的确定 | 第61-62页 |
| 4.3.6 酶标二抗最佳稀释浓度的选择 | 第62-63页 |
| 4.3.7 酶标二抗最佳反应时间的确定 | 第63-64页 |
| 4.3.8 底物最佳作用时间的选择 | 第64-65页 |
| 4.3.9 优化后的GTX2,3 间接竞争ELISA检测方法的反应条件 | 第65页 |
| 4.3.10 GTX2,3 间接竞争ELISA标准曲线的绘制及检测限的确定 | 第65-66页 |
| 4.3.11 GTX2,3 间接竞争ELISA准确度的测定 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4.4.1 GTX2,3- ic-ELISA检测方法的建立 | 第67-68页 |
| 4.4.2 最佳封闭条件的确定 | 第68页 |
| 4.4.3 影响显色反应的因素 | 第68-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-71页 |
| 5 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 导师简介 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80页 |
