| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 ω-3 多不饱和脂肪酸 | 第15-17页 |
| 1.1.1 ω-3 多不饱和脂肪酸概况 | 第15-16页 |
| 1.1.2 ω-3 多不饱和脂肪酸的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.2.1 ω-3 PUFAs参与脂质代谢 | 第16页 |
| 1.1.2.2 ω-3 PUFAs参与基因调控 | 第16页 |
| 1.1.2.3 ω-3 PUFAs调节细胞生长 | 第16页 |
| 1.1.2.4 ω-3 PUFAs参与免疫调节 | 第16-17页 |
| 1.1.2.5 ω-3 PUFAs的抗疾病作用 | 第17页 |
| 1.2 ω-6 /ω-3 PUFAs的平衡 | 第17-18页 |
| 1.3 脂肪酸脱氢酶Fat-1 基因的重要性 | 第18-19页 |
| 1.3.1 Fat-1 基因及其作用机制 | 第18页 |
| 1.3.2 Fat-1 转基因动物的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 转基因技术在品种培育中的应用 | 第19-22页 |
| 1.4.1 转基因动物的产生 | 第19-20页 |
| 1.4.2 转基因方法 | 第20-21页 |
| 1.4.3 转基因技术应用 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 鸡胚胎成纤维细胞的体外培养 | 第23-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 试验细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.2.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.2.2 主要试剂的配制 | 第23页 |
| 2.1.2.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 鸡胚胎成纤维细胞的原代培养 | 第24页 |
| 2.2.2 细胞的分离及传代 | 第24页 |
| 2.2.3 细胞的冻存 | 第24-25页 |
| 2.2.4 细胞的复苏 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 原代细胞的生长状况及形态特征 | 第25-26页 |
| 2.3.2 传代细胞的生长情况及形态特征 | 第26-27页 |
| 2.3.3 复苏细胞的生长状况及形态特征 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 结论 | 第29-30页 |
| 第三章 Fat-1 基因密码子优化及高效表达载体的构建 | 第30-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 宿主菌和载体 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 常用试剂配置 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要试验仪器 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 Fat-1 基因的优化与人工合成 | 第31-32页 |
| 3.2.2 cFat-1 基因的体外扩增和序列分析 | 第32-34页 |
| 3.2.3 重组表达载体的构建与鉴定 | 第34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.3.1 Fat-1 的优化 | 第34-35页 |
| 3.3.2 c Fat-1 基因的获得 | 第35-36页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.4 重组表达载体的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 结论 | 第40-41页 |
| 第四章c Fat-1 基因在鸡成纤维细胞中的表达 | 第41-53页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第41页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 重组载体质粒的大量提取 | 第42-43页 |
| 4.2.2 试验细胞的准备 | 第43页 |
| 4.2.3 细胞转染 | 第43页 |
| 4.2.4 阳性克隆的分子鉴定 | 第43-45页 |
| 4.2.5 细胞脂肪酸测定 | 第45-46页 |
| 4.3 结果分析 | 第46-50页 |
| 4.3.1 pLL3.7-cFat-1 在鸡胚胎成纤维细胞中的表达 | 第46-47页 |
| 4.3.2 转染细胞外源基因表达的分子鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 转染细胞的分子水平鉴定 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.5 结论 | 第52-53页 |
| 第五章 表达Fat-1 基因的转基因鸡的生成 | 第53-70页 |
| 5.1 试验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 试验用种蛋 | 第53页 |
| 5.1.2 主要试剂及耗材 | 第53页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第53-54页 |
| 5.1.4 仪器设备 | 第54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-59页 |
| 5.2.1 注射针的制备 | 第54页 |
| 5.2.2 蛋壳膜及代用蛋壳的的制备 | 第54-55页 |
| 5.2.3 待用种蛋的预处理 | 第55页 |
| 5.2.4 重组载体的显微注射 | 第55-56页 |
| 5.2.5 注射个体冰冻切片检测 | 第56页 |
| 5.2.6 注射个体各组织PCR检测 | 第56-57页 |
| 5.2.7 注射个体各组织RT-PCR鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.8 注射个体的脂肪酸测定 | 第58-59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 5.3.1 胚胎孵化情况统计 | 第59-60页 |
| 5.3.2 两种注射方法的比较 | 第60-62页 |
| 5.3.3 重组载体显微注射后不同组织荧光检测 | 第62-63页 |
| 5.3.4 转基因个体的组织PCR检测 | 第63-64页 |
| 5.3.5 转基因个体的RT-PCR检测 | 第64-65页 |
| 5.3.6 转基因个体脂肪酸测定结果 | 第65-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-69页 |
| 5.5 结论 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与创新 | 第70-71页 |
| 6.1 全文结论 | 第70页 |
| 6.2 论文的创新 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
| 导师评阅表 | 第80页 |
