| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 概述 | 第11-24页 |
| 1.1 胆固醇氧化酶的概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 胆固醇氧化酶的研究历史 | 第11-13页 |
| 1.1.2 胆固醇氧化酶的催化机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 胆固醇氧化酶的分离纯化方法 | 第14-16页 |
| 1.1.4 胆固醇氧化酶的酶活鉴定方法 | 第16页 |
| 1.1.5 胆固醇氧化酶的应用现状 | 第16-18页 |
| 1.2 维吉尼亚链霉菌IBL-14与胆固醇氧化酶 | 第18页 |
| 1.2.1 维吉尼亚链霉菌IBL-14的概述 | 第18页 |
| 1.2.2 维吉尼亚链霉菌IBL-14与胆固醇氧化酶 | 第18页 |
| 1.3 生物信息学分析 | 第18-22页 |
| 1.3.1 基因与功能预测 | 第18-20页 |
| 1.3.2 同源建模 | 第20-21页 |
| 1.3.3 定点突变 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第22页 |
| 1.5 研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 IBL-14中胆固醇氧化酶基因的生物信息学相关分析 | 第24-30页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 材料和方法 | 第25页 |
| 2.2.1 菌株 | 第25页 |
| 2.2.2 基因和蛋白序列确定 | 第25页 |
| 2.2.3 软件分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-29页 |
| 2.3.1 序列确定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 氨基酸的组成分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 蛋白质的等电点和分子量 | 第27页 |
| 2.3.4 S.virginiae IBL-14中的胆固醇氧化酶 | 第27-28页 |
| 2.3.5 s virginiae IBL-14与其他链霉菌内胆固醇氧化酶的进化关系 | 第28-29页 |
| 2.4 结论 | 第29-30页 |
| 第三章 S.virginiae IBL-14 cho基因的克隆与表达 | 第30-50页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 材料和方法 | 第30-42页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第30-31页 |
| 3.2.2 主要试剂,试剂盒和试剂配制 | 第31-33页 |
| 3.2.3 培养基 | 第33-34页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.5 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-49页 |
| 3.3.1 S. virginiae IBL-14菌株基因组的提取 | 第42页 |
| 3.3.2 cho基因的克隆 | 第42-44页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.4 E.coli JM109转化和鉴定 | 第45-47页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第47-48页 |
| 3.3.6 菌株的保存 | 第48-49页 |
| 3.4 结论 | 第49-50页 |
| 第四章 Cho-sv04的纯化与功能鉴定 | 第50-58页 |
| 4.1 前言 | 第50页 |
| 4.2 材料和方法 | 第50-54页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第50-51页 |
| 4.2.2 主要仪器和试剂 | 第51页 |
| 4.2.3 纯化方法 | 第51-54页 |
| 4.2.4 功能鉴定方法 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 4.3.1 Cho-sv04酶的纯化 | 第54-56页 |
| 4.3.2 Cho-sv04酶的功能鉴定 | 第56-57页 |
| 4.4 结论 | 第57-58页 |
| 第五章 Cho-sv04酶的同源建模与机理研究 | 第58-74页 |
| 5.1 前言 | 第58-59页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 5.2.2 分析软件和数据库 | 第60页 |
| 5.3 同源建模 | 第60-67页 |
| 5.3.1 实验方法 | 第60-61页 |
| 5.3.2 结果与讨论 | 第61-67页 |
| 5.4 定点突变 | 第67-72页 |
| 5.4.1 实验材料 | 第68页 |
| 5.4.2 设计引物 | 第68页 |
| 5.4.3 定点突变质粒的获得,验证 | 第68-69页 |
| 5.4.4 突变蛋白的表达和检测 | 第69-70页 |
| 5.4.5 突变蛋白的功能鉴定 | 第70页 |
| 5.4.6 结果与讨论 | 第70-72页 |
| 5.5 结论 | 第72-74页 |
| 第六章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 结论 | 第74-75页 |
| 6.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 论文与专利 | 第81-82页 |
| 附件1 四种胆固醇氧化酶的基因序列和蛋白序列 | 第82-85页 |
