摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
第一章 CRISPR/CAS系统及HIF-1α基因的介绍 | 第15-19页 |
1 CRISPR/CAS系统 | 第15-17页 |
1.1 CRISPR/CAS系统的发现与结构 | 第15-16页 |
1.2 CRISPR/CAS系统的作用机制 | 第16页 |
1.3 CRISPR/CAS系统面临的问题和研究进展 | 第16-17页 |
2 HIF-1α基因的介绍 | 第17-19页 |
2.1 HIF-1α基因的发现与结构 | 第17页 |
2.2 HIF-1α基因与毛囊发育的关系 | 第17-19页 |
第二章 利用原核显微注射技术制备HIF-1α转基因小鼠及其表达检测 | 第19-51页 |
1 前言 | 第19-21页 |
1.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验 | 第19页 |
1.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建 | 第19-20页 |
1.3 定点整合载体细胞水平的检测 | 第20页 |
1.4 转基因小鼠的制备 | 第20-21页 |
1.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测 | 第21页 |
2 材料与方法 | 第21-35页 |
2.1 材料 | 第21-23页 |
2.1.1 主要仪器设备 | 第21-22页 |
2.1.2 主要试剂、耗材 | 第22页 |
2.1.3 配制试剂 | 第22-23页 |
2.2 方法 | 第23-35页 |
2.2.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验 | 第23-27页 |
2.2.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建 | 第27-31页 |
2.2.3 定点整合载体细胞水平的检测 | 第31-32页 |
2.2.4 转基因小鼠的制备 | 第32-35页 |
2.2.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测 | 第35页 |
3 结果 | 第35-48页 |
3.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验 | 第35-39页 |
3.1.1 HIF-1α基因cDNA序列的分析与鉴定 | 第35-36页 |
3.1.2 HIF-1α基因过表达载体的构建 | 第36-37页 |
3.1.3 MEF细胞的分离与培养 | 第37页 |
3.1.4 实时定量PCR结果 | 第37-38页 |
3.1.5 蛋白印记法(Western Blot)检测结果 | 第38-39页 |
3.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建 | 第39-43页 |
3.2.1 人源K14启动子的克隆 | 第39-40页 |
3.2.2 打靶载体上游同源臂的获得 | 第40页 |
3.2.3 人源K14启动子与骨架pMLKCPR载体的连接 | 第40-41页 |
3.2.4 上游同源臂与中间载体pMK的连接结果 | 第41-42页 |
3.2.5 目的基因HIF-1α与中间载体pMLK的连接结果 | 第42-43页 |
3.3 定点整合载体细胞水平的检测 | 第43-45页 |
3.3.1 质粒转染效率结果 | 第43-44页 |
3.3.2 随机检测引物的检测结果 | 第44页 |
3.3.3 定点整合引物的检测 | 第44-45页 |
3.4 转基因小鼠的制备 | 第45-46页 |
3.4.1 原核注射的结果 | 第45页 |
3.4.2 转基因小鼠的鉴定 | 第45-46页 |
3.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测 | 第46-48页 |
3.5.1 实时定量PCR的结果 | 第46-47页 |
3.5.2 Western Blot检测结果 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
4.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验 | 第48-49页 |
4.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建 | 第49页 |
4.3 定点整合载体细胞水平的检测 | 第49-50页 |
4.4 转基因小鼠的制备 | 第50页 |
4.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测 | 第50-51页 |
结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-61页 |
附录1 | 第61-62页 |
附录2 | 第62-64页 |
致谢 | 第64页 |