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利用原核显微注射技术制备HIF-1α转基因小鼠及其表达检测

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
缩略词表第13-15页
第一章 CRISPR/CAS系统及HIF-1α基因的介绍第15-19页
    1 CRISPR/CAS系统第15-17页
        1.1 CRISPR/CAS系统的发现与结构第15-16页
        1.2 CRISPR/CAS系统的作用机制第16页
        1.3 CRISPR/CAS系统面临的问题和研究进展第16-17页
    2 HIF-1α基因的介绍第17-19页
        2.1 HIF-1α基因的发现与结构第17页
        2.2 HIF-1α基因与毛囊发育的关系第17-19页
第二章 利用原核显微注射技术制备HIF-1α转基因小鼠及其表达检测第19-51页
    1 前言第19-21页
        1.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验第19页
        1.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建第19-20页
        1.3 定点整合载体细胞水平的检测第20页
        1.4 转基因小鼠的制备第20-21页
        1.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测第21页
    2 材料与方法第21-35页
        2.1 材料第21-23页
            2.1.1 主要仪器设备第21-22页
            2.1.2 主要试剂、耗材第22页
            2.1.3 配制试剂第22-23页
        2.2 方法第23-35页
            2.2.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验第23-27页
            2.2.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建第27-31页
            2.2.3 定点整合载体细胞水平的检测第31-32页
            2.2.4 转基因小鼠的制备第32-35页
            2.2.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测第35页
    3 结果第35-48页
        3.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验第35-39页
            3.1.1 HIF-1α基因cDNA序列的分析与鉴定第35-36页
            3.1.2 HIF-1α基因过表达载体的构建第36-37页
            3.1.3 MEF细胞的分离与培养第37页
            3.1.4 实时定量PCR结果第37-38页
            3.1.5 蛋白印记法(Western Blot)检测结果第38-39页
        3.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建第39-43页
            3.2.1 人源K14启动子的克隆第39-40页
            3.2.2 打靶载体上游同源臂的获得第40页
            3.2.3 人源K14启动子与骨架pMLKCPR载体的连接第40-41页
            3.2.4 上游同源臂与中间载体pMK的连接结果第41-42页
            3.2.5 目的基因HIF-1α与中间载体pMLK的连接结果第42-43页
        3.3 定点整合载体细胞水平的检测第43-45页
            3.3.1 质粒转染效率结果第43-44页
            3.3.2 随机检测引物的检测结果第44页
            3.3.3 定点整合引物的检测第44-45页
        3.4 转基因小鼠的制备第45-46页
            3.4.1 原核注射的结果第45页
            3.4.2 转基因小鼠的鉴定第45-46页
        3.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测第46-48页
            3.5.1 实时定量PCR的结果第46-47页
            3.5.2 Western Blot检测结果第47-48页
    4 讨论第48-51页
        4.1 HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验第48-49页
        4.2 HIF-1α基因定点整合载体的构建第49页
        4.3 定点整合载体细胞水平的检测第49-50页
        4.4 转基因小鼠的制备第50页
        4.5 HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测第50-51页
结论第51-52页
参考文献第52-61页
附录1第61-62页
附录2第62-64页
致谢第64页

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