| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-25页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| ·黄曲霉毒素及其危害 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素的致癌机理 | 第15-17页 |
| ·黄曲霉毒素B1 的代谢过程 | 第15-16页 |
| ·黄曲霉毒素B1 的基因毒性和致癌性 | 第16-17页 |
| 2 尿素循环 | 第17-21页 |
| ·尿素循环的关键酶 | 第17-19页 |
| ·氨甲酰磷酸合成酶 | 第17-18页 |
| ·鸟氨酸氨甲酰转移酶 | 第18-19页 |
| ·其他关键酶 | 第19页 |
| ·尿素循环障碍 | 第19-21页 |
| ·尿素循环障碍类型和临床表现 | 第20-21页 |
| ·高血氨症Ⅰ型 | 第20页 |
| ·高血氨症Ⅱ型 | 第20页 |
| ·尿素循环障碍其他类型 | 第20-21页 |
| ·尿素循环与肝癌关系 | 第21页 |
| 3 RNA 干扰技术 | 第21-23页 |
| ·RNA 干扰技术在基因功能研究中的应用 | 第21页 |
| ·RNA 干扰技术在哺乳动物中的应用 | 第21-23页 |
| ·RNA 干扰与肿瘤基因治疗 | 第21-22页 |
| ·RNA 干扰与病毒性疾病治疗 | 第22页 |
| ·RNA 干扰在治疗其他疾病方面 | 第22-23页 |
| ·RNA 干扰技术在农药研究中的应用 | 第23页 |
| 4 实时定量PCR 在基因表达分析研究中的应用 | 第23-24页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 黄曲霉毒素B1 的提取和浓度测定 | 第25-29页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·毒素检测试剂盒 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-26页 |
| ·黄曲霉毒素B1 | 第25-26页 |
| ·黄曲霉毒素B1 标准菌株的培养 | 第25页 |
| ·黄曲霉毒素B1 的提取 | 第25页 |
| ·ELISA 标准曲线法测定黄曲霉毒素B1 的浓度 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-28页 |
| ·黄曲霉毒素菌株的培养 | 第26页 |
| ·黄曲霉毒素B1 的浓度 | 第26-28页 |
| 4 讨论 | 第28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 第三章 尿素循环关键基因的变化与分布及其血氨动态变化 | 第29-41页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·黄曲霉毒素B1 粗提液 | 第29页 |
| ·引物序列 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-33页 |
| ·感染老鼠 | 第30页 |
| ·血氨测定 | 第30页 |
| ·黄曲霉毒素B1 感染小鼠中体重的测定 | 第30页 |
| ·小白鼠肝脏RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第31-32页 |
| ·荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·小白鼠血氨测定 | 第33-35页 |
| ·血氨标准曲线的制备 | 第33-34页 |
| ·血氨浓度的动态变化 | 第34-35页 |
| ·小白鼠体重测定 | 第35页 |
| ·RNA 提取结果 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量PCR 结果 | 第36-38页 |
| ·cps1、otc、gapdh 和si15 基因的扩增曲线 | 第36-37页 |
| ·cps1、otc、gapdh 和si15 基因的相对定量 | 第37-38页 |
| ·cps1、otc 和si15 基因在小鼠各组织的分布情况 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| ·实时定量PCR 的关键步骤和数据分析 | 第39页 |
| ·cps1、otc 和si15 基因的表达变化 | 第39-40页 |
| ·不同浓度的黄曲霉毒素B1 对小白鼠体重的影响 | 第40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 第四章 cps1、otc 和si15 载体的构建及otc 与si15 蛋白体外互作 | 第41-57页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·实验模式动物 | 第41页 |
| ·质粒和菌株 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-48页 |
| ·小鼠肝脏RNA 的提取 | 第42页 |
| ·RT-PCR | 第42页 |
| ·基因的扩增 | 第42-43页 |
| ·载体的构建 | 第43-45页 |
| ·基因的原核表达 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的大量表达与纯化 | 第46页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第46页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| ·Far western | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-56页 |
| ·RNA 提取与RT-PCR | 第48-49页 |
| ·载体的构建 | 第49-52页 |
| ·蛋白质的表达与纯化 | 第52-53页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第53-55页 |
| ·蛋白互作分析 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 第五章 cps1 生物学研究 | 第57-69页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-63页 |
| ·设计用于干扰的寡核苷酸片段 | 第57-58页 |
| ·构建干扰载体 | 第58-60页 |
| ·细胞转染及阳性细胞克隆的筛选和鉴定 | 第60页 |
| ·细胞总RNA 提取 | 第60页 |
| ·RT-PCR | 第60页 |
| ·实时定量PCR 检测RNA 干扰水平 | 第60-62页 |
| ·Western | 第62页 |
| ·黄曲霉毒素B1 对细胞cps1 表达的影响 | 第62页 |
| ·RNA 干扰对细胞的影响 | 第62-63页 |
| ·MTT 比色法测定细胞增殖活性 | 第62页 |
| ·细胞对黄曲霉毒素B1 的耐受能力 | 第62-63页 |
| 3 实验结果与分析 | 第63-67页 |
| ·重组子验证 | 第63页 |
| ·RNA 提取 | 第63-64页 |
| ·RNAi 干扰效果 | 第64页 |
| ·黄曲霉毒素 B1 对细胞 cps1 表达的影响 | 第64-65页 |
| ·黄曲霉毒素 B1 对不同细胞的半抑制率测定 | 第65页 |
| ·干扰 cps1 基因后细胞对黄曲霉毒素 B1 的耐受能力 | 第65-66页 |
| ·干扰 cps1 后相关蛋白的表达变化 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
