| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 1 引言 | 第15-20页 |
| 1.1 附睾的概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 附睾的结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 附睾蛋白分泌特点 | 第16页 |
| 1.1.3 附睾的功能 | 第16-17页 |
| 1.2 附睾抗氧化 | 第17-18页 |
| 1.2.1 精子与ROS | 第17页 |
| 1.2.2 附睾中ROS的来源 | 第17页 |
| 1.2.3 附睾中的主要抗氧化剂 | 第17-18页 |
| 1.3 附睾特异表达的GPx5 | 第18-19页 |
| 1.3.1 GPx5基因结构定位 | 第18页 |
| 1.3.2 GPx5的表达特性 | 第18页 |
| 1.3.3 GPx5的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.4 GPx5的表达调控 | 第19页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 睾丸和附睾的分段采集 | 第22页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 总RNA反转录 | 第23页 |
| 2.2.4 PCR | 第23-24页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.2.6 组织总蛋白的提取及浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.2.7 Western blot印迹杂交 | 第26页 |
| 2.2.8 组织块石蜡包埋 | 第26页 |
| 2.2.9 免疫组化实验方法 | 第26-27页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-35页 |
| 2.3.1 组织总RNA的电泳检测 | 第27-28页 |
| 2.3.2 PCR产物特异性检测 | 第28-29页 |
| 2.3.3 GPx5和β-actin基因的RT-qPCR | 第29-30页 |
| 2.3.4 GPx5基因在绒山羊附睾和睾丸的转录表达 | 第30-31页 |
| 2.3.5 蛋白浓度测定 | 第31页 |
| 2.3.6 GPx5蛋白在绒山羊附睾的表达 | 第31-33页 |
| 2.3.7 GPx5蛋白在不同时期绒山羊附睾和睾丸的定位 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 3 内蒙古绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性 | 第37-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 实验取材 | 第38页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 组织分离 | 第39页 |
| 3.2.2 附睾上皮细胞培养 | 第39-40页 |
| 3.2.3 免疫细胞化学染色法检测角蛋白18 | 第40-41页 |
| 3.2.4 免疫荧光化学法检测GPx5 | 第41页 |
| 3.2.5 透射电镜观察 | 第41页 |
| 3.2.6 细胞纯度检测 | 第41-42页 |
| 3.2.7 附睾上皮细胞生长曲线 | 第42页 |
| 3.2.8 细胞凋亡率的检测 | 第42页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第42-43页 |
| 3.3 结果 | 第43-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-56页 |
| 4 甾体类激素对绒山羊附睾上皮细胞增殖的影响 | 第56-69页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第56页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第56-57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 附睾上皮细胞培养 | 第57页 |
| 4.2.2 睾酮/氢化可的松对AR的影响 | 第57页 |
| 4.2.3 免疫细胞化学、免疫组化实验方法 | 第57页 |
| 4.2.4 附睾上皮细胞生长曲线 | 第57页 |
| 4.2.5 CCK法检测附睾上皮细胞增殖 | 第57页 |
| 4.2.6 附睾上皮细胞总RNA提取 | 第57-58页 |
| 4.2.7 总RNA反转录合成cDNA | 第58页 |
| 4.2.8 PCR | 第58-59页 |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR | 第59页 |
| 4.2.10 ELISA法检测附睾上皮细胞AR | 第59-60页 |
| 4.2.11 数据分析 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-67页 |
| 4.3.1 睾酮对附睾上皮细胞增殖的影响 | 第60页 |
| 4.3.2 氢化可的松对附睾上皮细胞增殖的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.3 睾酮和氢化可的松对附睾上皮细胞增殖的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.4 睾酮和氢化可的松对细胞增殖具有协同作用的可能原因 | 第62-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 5 睾酮对GPx5表达的调控作用 | 第69-78页 |
| 5.1 实验材料 | 第69页 |
| 5.1.1 附睾上皮细胞培养 | 第69页 |
| 5.1.2 主要实验仪器 | 第69页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 不同浓度睾酮对细胞的干预 | 第70页 |
| 5.2.2 附睾上皮细胞ROS检测 | 第70页 |
| 5.2.3 细胞蛋白提取 | 第70页 |
| 5.2.4 ELISA法检测附睾上皮细胞GPx5/AR | 第70页 |
| 5.2.5 数据分析 | 第70页 |
| 5.3 结果 | 第70-76页 |
| 5.3.1 原代培养附睾上皮细胞GPx5表达量呈时间依赖性减少 | 第70-71页 |
| 5.3.2 不同浓度睾酮对附睾上皮细胞内ROS的影响 | 第71-73页 |
| 5.3.3 不同浓度睾酮对附睾上皮细胞GPx5表达量的影响 | 第73-74页 |
| 5.3.4 不同浓度睾酮对附睾上皮细胞AR表达量的影响 | 第74-76页 |
| 5.4 讨论 | 第76-78页 |
| 6 结论 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 作者简介 | 第90页 |
