符号说明 | 第4-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
ABSTRACT | 第11-12页 |
1. 前言 | 第13-29页 |
1.1 玉米纹枯病 | 第13-19页 |
1.1.1 玉米纹枯病的病害症状及危害时期 | 第13-14页 |
1.1.2 玉米纹枯病的病原学特性 | 第14页 |
1.1.3 玉米纹枯病原的生理学特性 | 第14-15页 |
1.1.4 玉米纹枯病的侵染循环和侵染途径 | 第15页 |
1.1.5 玉米纹枯病的致病机制 | 第15-16页 |
1.1.6 纹枯病菌寄主抗病机制 | 第16-17页 |
1.1.7 玉米纹枯病抗病种质资源的研究 | 第17-18页 |
1.1.8 玉米纹枯病的抗性基因 | 第18-19页 |
1.2 植物启动子 | 第19-28页 |
1.2.1 植物启动子的结构和特征 | 第19-20页 |
1.2.1.1 转录起始位点 | 第19页 |
1.2.1.2 TATA box | 第19-20页 |
1.2.1.3 CAAT box | 第20页 |
1.2.1.4 GC box | 第20页 |
1.2.2 植物启动子的分类 | 第20-24页 |
1.2.2.1 组成型启动子 | 第20-21页 |
1.2.2.2 组织特异性启动子 | 第21-22页 |
1.2.2.3 诱导型启动子 | 第22-24页 |
1.2.2.3.1 病原诱导表达启动子 | 第22-23页 |
1.2.2.3.2 其他类型诱导表达启动子 | 第23-24页 |
1.2.3 启动子的预测及克隆方法 | 第24-25页 |
1.2.3.1 启动子预测工具 | 第24-25页 |
1.2.3.2 启动子的克隆 | 第25页 |
1.2.4 病原诱导启动子的研究方法 | 第25-27页 |
1.2.4.1 瞬时表达分析法 | 第25-26页 |
1.2.4.2 稳定表达分析 | 第26页 |
1.2.4.3 缺失和突变分析 | 第26页 |
1.2.4.4 酵母单杂交技术 | 第26-27页 |
1.2.4.5 凝胶阻滞技术 | 第27页 |
1.2.5 病原诱导启动子的应用 | 第27-28页 |
1.3 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
2. 材料与方法 | 第29-34页 |
2.1 水稻及烟草品种 | 第29页 |
2.2 菌株和载体 | 第29页 |
2.3 各载体的构建 | 第29-32页 |
2.3.1 序列克隆引物的设计 | 第29页 |
2.3.2 DNA序列的扩增体系 | 第29-30页 |
2.3.3 PCR产物的切胶回收 | 第30页 |
2.3.4 载体、目的片段的酶切、纯化及连接 | 第30-31页 |
2.3.5 连接产物的热激转化 | 第31页 |
2.3.6 质粒的提取 | 第31页 |
2.3.7 质粒的电击转化 | 第31-32页 |
2.4 农杆菌介导的遗传转化 | 第32-33页 |
2.4.1 水稻的遗传转化 | 第32页 |
2.4.2 启动子瞬时表达系统 | 第32-33页 |
2.5 转基因植株阳性检测 | 第33页 |
2.5.1 植物基因组DNA的提取 | 第33页 |
2.5.2 PCR阳性检测 | 第33页 |
2.6 纹枯病菌接种 | 第33页 |
2.7 GFP的定性及定量分析 | 第33-34页 |
3. 结果与分析 | 第34-44页 |
3.1 GRMZM2G315431和GRMZM2G174449基因启动子纹枯病病原诱导核心区域的序列相似性分析 | 第34页 |
3.2 GT/CTGA顺式作用元件的分析鉴定 | 第34-40页 |
3.2.1 GT/CTGA顺式作用元件系列载体的构建 | 第34-35页 |
3.2.2 GT/CTGA元件在烟草中瞬时表达后对YWK196的诱导响应 | 第35-37页 |
3.2.3 GTTGA元件转基因水稻的阳性鉴定 | 第37-38页 |
3.2.4 GTTGA元件在转基因水稻中稳定表达后对YWK196的诱导响应 | 第38页 |
3.2.5 不同重复倍数对GTTGA元件病原诱导活性的影响 | 第38-40页 |
3.3 TATA/TT顺式作用元件的分析鉴定 | 第40-44页 |
3.3.1 TATA/TT顺式作用元件系列载体的构建 | 第40-41页 |
3.3.2 TATA/TT元件在烟草中瞬时表达后对YWK196的诱导响应 | 第41-42页 |
3.3.3 TATAT元件转基因水稻的阳性鉴定 | 第42-43页 |
3.3.4 TATAT元件在转基因水稻中稳定表达后对YWK196的诱导响应 | 第43-44页 |
4. 讨论 | 第44-47页 |
4.1 新的纹枯病菌核心顺式作用元件的鉴定 | 第44-45页 |
4.2 玉米纹枯病抗病机制的多样性 | 第45页 |
4.3 纹枯病菌诱导顺式作用元件的应用前景 | 第45-47页 |
参考文献 | 第47-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
附录 | 第59-65页 |
附录 1:常规培养基及溶液配制 | 第59-65页 |
附录 2:在读期间发表论文及专利目录 | 第65页 |