| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-32页 |
| 1.1 纤维素酶的概况 | 第14-17页 |
| 1.1.1 纤维素酶系的组成 | 第14-16页 |
| 1.1.2 纤维素的酶降解 | 第16-17页 |
| 1.2 多糖单加氧酶的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 多糖单加氧酶的研究过程 | 第17-19页 |
| 1.2.2 多糖单加氧酶的分类 | 第19-20页 |
| 1.3 多糖单加氧酶的结构与功能 | 第20-23页 |
| 1.3.1 多糖单加氧酶的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 PMO的催化机制 | 第21-22页 |
| 1.3.3 PMO的协同作用 | 第22-23页 |
| 1.3.4 PMO过氧化氢的产生 | 第23页 |
| 1.4 嗜热真菌的研究概况 | 第23-25页 |
| 1.4.1 嗜热真菌的定义及分布状况 | 第23-24页 |
| 1.4.2 研究嗜热真菌的意义 | 第24-25页 |
| 1.4.3 嗜热真菌分子生物学研究概况 | 第25页 |
| 1.5 嗜热疏绵菌转录组分析 | 第25-27页 |
| 1.6 嗜热真菌多糖单加氧酶的获得及应用 | 第27-31页 |
| 1.6.1 嗜热真菌新的热稳定纤维素氧化酶基因的分离与筛选 | 第27-28页 |
| 1.6.2 嗜热真菌热稳定纤维素氧化酶定向进化 | 第28-30页 |
| 1.6.2.1.嗜热真菌热稳定纤维素氧化酶基因突变及突变库构建 | 第28页 |
| 1.6.2.2 嗜热真菌高活性热稳定纤维素氧化酶基因突变体筛选 | 第28-30页 |
| 1.6.3 嗜热真菌高活性热稳定氧化酶基因工程菌的构建与发酵条件和酶解效率研究 | 第30页 |
| 1.6.4 嗜热真菌高活性热稳定纤维素氧化酶制剂产品和应用研究 | 第30-31页 |
| 1.7 选题的目的意义、研究内容 | 第31-32页 |
| 1.7.1 研究的目的及其意义 | 第31页 |
| 1.7.2 研究的内容 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-52页 |
| 2.1 材料 | 第32-38页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第32-33页 |
| 2.1.2 酶和生化试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.3 仪器 | 第34页 |
| 2.1.4 处理软件 | 第34-35页 |
| 2.1.5 培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第36-38页 |
| 2.2 嗜热疏绵菌转录组测序 | 第38-39页 |
| 2.2.1 样品的制备 | 第38页 |
| 2.2.2 RNA-seq转录组测序 | 第38-39页 |
| 2.3 嗜热疏绵菌PMOs基因的克隆及序列分析 | 第39-43页 |
| 2.3.1 基因的扩增 | 第39-42页 |
| 2.3.1.1 PCR引物设计 | 第39-41页 |
| 2.3.1.2 反转录cDNA 第一链的合成及 PCR 扩增 | 第41-42页 |
| 2.3.2 PCR产物回收及载体连接 | 第42页 |
| 2.3.3 克隆载体的连接及转化 | 第42-43页 |
| 2.3.4 重组质粒的DNA的提取 | 第43页 |
| 2.4 PMOs基因在毕赤酵母中的高效表达 | 第43-47页 |
| 2.4.1 酵母表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.4.2 质粒的线性化及去磷酸化 | 第45页 |
| 2.4.3 酵母转化（电击法） | 第45-46页 |
| 2.4.4 酵母转化子的筛选与鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4.5 酵母工程菌的培养和多糖单加氧酶的诱导分泌表达 | 第47页 |
| 2.5 重组多糖单加氧酶的分离与纯化 | 第47-48页 |
| 2.5.1 硫酸铵沉淀 | 第47页 |
| 2.5.2.HisTrap~(TM) FF柱层析 | 第47-48页 |
| 2.5.3 蛋白质分子量测定和纯度鉴定 | 第48页 |
| 2.5.4 蛋白的氨基酸序列分析 | 第48页 |
| 2.6 四个PMO的酶学特性研究 | 第48-50页 |
| 2.6.1 反应最适温度 | 第49页 |
| 2.6.2 热稳定性 | 第49页 |
| 2.6.3 PMO与纤维素酶的协同作用 | 第49页 |
| 2.6.4 多糖单加氧酶产生过氧化氢的测定 | 第49-50页 |
| 2.7 酶促反应产物的分析 | 第50-52页 |
| 2.7.1 酶促反应产物的TLC分析 | 第50页 |
| 2.7.2 荧光辅助糖电泳（FACE）分析酶解产物 | 第50-51页 |
| 2.7.3 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 | 第51-52页 |
| 3. 结果与分析 | 第52-72页 |
| 3.1 转录组测序数据质量情况汇总 | 第52-53页 |
| 3.1.1 样品检测 | 第52-53页 |
| 3.2 表达差异表达分析 | 第53-54页 |
| 3.3 差异基因中目的基因的筛选 | 第54-63页 |
| 3.3.1 四个PMOs的序列分析 | 第55-56页 |
| 3.3.2 嗜热疏绵菌多糖单加氧酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第56页 |
| 3.3.3 目的基因的扩增与鉴定 | 第56-58页 |
| 3.3.4 多糖单加氧酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第58-63页 |
| 3.4 多糖单加氧酶的特性研究 | 第63-72页 |
| 3.4.1 多糖单加氧酶的最适反应温度 | 第63-64页 |
| 3.4.2 多糖单加氧酶的协同作用 | 第64-65页 |
| 3.4.3 多糖单加氧酶产生过氧化氢的测定 | 第65页 |
| 3.4.4 多糖单加氧降解产物分析 | 第65-67页 |
| 3.4.5 多糖单加氧酶酶解产物的FACE电泳 | 第67-68页 |
| 3.4.6 多糖单加氧酶的氧化性研究 | 第68页 |
| 3.4.7 多糖单加氧酶活性位点研究 | 第68-70页 |
| 3.4.8 多糖单加氧酶的飞行质谱分析 | 第70-72页 |
| 4.讨论 | 第72-78页 |
| 4.1 转录组数据的分析 | 第72-74页 |
| 4.2 嗜热疏绵菌多糖单加氧酶的克隆 | 第74-76页 |
| 4.2.1 表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 4.2.2 表达载体的线性化及不同线性化方式的影响 | 第75页 |
| 4.2.3 影响毕赤酵母高效表达的原因 | 第75页 |
| 4.2.4 蛋白的翻译及加工 | 第75-76页 |
| 4.3 嗜热疏绵菌多糖单加氧酶及其表达 | 第76-77页 |
| 4.4.多糖单加氧酶氧化裂解性的研究 | 第77-78页 |
| 5 结论 | 第78-80页 |
| 5.1 转录组数据分析 | 第78-79页 |
| 5.2 多糖单加氧酶的克隆表达纯化 | 第79页 |
| 5.3 多糖单加氧酶酶解产物分析 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
