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Cathay拓扑型O型口蹄疫突变病毒的拯救及其抗原稳定性研究

摘要第3-4页
ABSTRACT第4页
缩略语中英文对照表第7-8页
第一章 概述第8-15页
    1.1 口蹄疫概述第8-9页
    1.2 口蹄疫病毒概述第9页
    1.3 口蹄疫灭活疫苗及其抗原稳定性概述第9-13页
        1.3.1 口蹄疫灭活疫苗概述第9-11页
        1.3.2 口蹄疫病毒稳定性研究概述第11-13页
    1.4 我国O型FMDV Cathay拓扑型流行情况第13-14页
    1.5 本研究的策略、方法及目标第14-15页
第二章 重组质粒的构建与突变病毒的拯救第15-33页
    2.1 引言第15页
    2.2 材料第15-17页
        2.2.1 主要试剂第15-16页
        2.2.2 主要耗材第16页
        2.2.3 主要仪器第16页
        2.2.4 试剂的配制第16-17页
        2.2.5 毒株来源第17页
    2.3 方法第17-26页
        2.3.1 O型FMD疫苗种毒O/GX/09-7 毒株P1区序列定点突变引物设计第17-18页
        2.3.2 含碱基突变的O/GX/09-7 毒株P1区序列PCR扩增第18-19页
        2.3.3 目的基因加A反应第19页
        2.3.4 PCR产物电泳与纯化第19-20页
        2.3.5 目的基因片段连接至克隆载体第20页
        2.3.6 菌落PCR筛选阳性克隆质粒第20-21页
        2.3.7 阳性克隆质粒提取第21页
        2.3.8 克隆质粒酶切鉴定第21-22页
        2.3.9 含O/GX/09-7 毒株P1区序列的重组质粒的构建第22-23页
        2.3.10 重组质粒线性化处理第23页
        2.3.11 DNA模板去除RNase处理第23页
        2.3.12 DNA模板纯化第23-24页
        2.3.13 体外转录突变病毒基因组RNA第24页
        2.3.14 突变病毒基因组RNA转染细胞第24页
        2.3.15 突变病毒传代与RT-PCR鉴定第24-26页
    2.4 结果第26-31页
        2.4.1 含碱基突变的O/GX/09-7 毒株P1区片段PCR扩增结果第26页
        2.4.2 克隆质粒酶切鉴定结果第26-27页
        2.4.3 重组质粒酶切鉴定结果第27-28页
        2.4.4 突变病毒基因组RNA体外转录及突变病毒拯救结果第28-31页
    2.5 讨论第31-33页
        2.5.1 突变病毒的拯救第31页
        2.5.2 结构蛋白氨基酸替换尝试第31页
        2.5.3 本章试验结论第31-33页
第三章 突变病毒酸热稳定性的测定第33-43页
    3.1 引言第33-34页
    3.2 材料第34页
        3.2.1 主要试剂、耗材第34页
        3.2.2 主要仪器第34页
        3.2.3 溶液配制第34页
    3.3 方法第34-36页
        3.3.1 TCID50试验第34页
        3.3.2 FMDV灭活及灭活抗原浓缩第34-35页
        3.3.3 ELISA测定 146S粒子含量第35页
        3.3.4 FMDV酸稳定性测定试验第35-36页
        3.3.5 FMDV热稳定性测定第36页
        3.3.6 突变病毒遗传稳定性测定第36页
        3.3.7 突变病毒部分结构蛋白同源模建分析第36页
    3.4 结果第36-41页
        3.4.1 三株FMDV酸稳定性测定结果第36-38页
        3.4.2 三株FMDV热稳定性测定结果第38页
        3.4.3 突变病毒遗传稳定性测定结果第38-40页
        3.4.4 突变病毒结构蛋白同源模建结果第40-41页
    3.5 讨论第41-43页
        3.5.1 影响FMDV稳定性的氨基酸位点不唯一第41-42页
        3.5.2 FMDV结构蛋白同源模建第42-43页
第四章 全文结论第43-44页
    4.1 试验结论第43页
    4.2 下一步工作的设想第43-44页
参考文献第44-49页
致谢第49-50页
作者简历第50页

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