| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 缩略语中英文对照表 | 第7-8页 |
| 第一章 概述 | 第8-15页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第8-9页 |
| 1.2 口蹄疫病毒概述 | 第9页 |
| 1.3 口蹄疫灭活疫苗及其抗原稳定性概述 | 第9-13页 |
| 1.3.1 口蹄疫灭活疫苗概述 | 第9-11页 |
| 1.3.2 口蹄疫病毒稳定性研究概述 | 第11-13页 |
| 1.4 我国O型FMDV Cathay拓扑型流行情况 | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的策略、方法及目标 | 第14-15页 |
| 第二章 重组质粒的构建与突变病毒的拯救 | 第15-33页 |
| 2.1 引言 | 第15页 |
| 2.2 材料 | 第15-17页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.2.2 主要耗材 | 第16页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第16页 |
| 2.2.4 试剂的配制 | 第16-17页 |
| 2.2.5 毒株来源 | 第17页 |
| 2.3 方法 | 第17-26页 |
| 2.3.1 O型FMD疫苗种毒O/GX/09-7 毒株P1区序列定点突变引物设计 | 第17-18页 |
| 2.3.2 含碱基突变的O/GX/09-7 毒株P1区序列PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.3.3 目的基因加A反应 | 第19页 |
| 2.3.4 PCR产物电泳与纯化 | 第19-20页 |
| 2.3.5 目的基因片段连接至克隆载体 | 第20页 |
| 2.3.6 菌落PCR筛选阳性克隆质粒 | 第20-21页 |
| 2.3.7 阳性克隆质粒提取 | 第21页 |
| 2.3.8 克隆质粒酶切鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.9 含O/GX/09-7 毒株P1区序列的重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.3.10 重组质粒线性化处理 | 第23页 |
| 2.3.11 DNA模板去除RNase处理 | 第23页 |
| 2.3.12 DNA模板纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.13 体外转录突变病毒基因组RNA | 第24页 |
| 2.3.14 突变病毒基因组RNA转染细胞 | 第24页 |
| 2.3.15 突变病毒传代与RT-PCR鉴定 | 第24-26页 |
| 2.4 结果 | 第26-31页 |
| 2.4.1 含碱基突变的O/GX/09-7 毒株P1区片段PCR扩增结果 | 第26页 |
| 2.4.2 克隆质粒酶切鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.4.3 重组质粒酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.4.4 突变病毒基因组RNA体外转录及突变病毒拯救结果 | 第28-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-33页 |
| 2.5.1 突变病毒的拯救 | 第31页 |
| 2.5.2 结构蛋白氨基酸替换尝试 | 第31页 |
| 2.5.3 本章试验结论 | 第31-33页 |
| 第三章 突变病毒酸热稳定性的测定 | 第33-43页 |
| 3.1 引言 | 第33-34页 |
| 3.2 材料 | 第34页 |
| 3.2.1 主要试剂、耗材 | 第34页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第34页 |
| 3.3 方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 TCID50试验 | 第34页 |
| 3.3.2 FMDV灭活及灭活抗原浓缩 | 第34-35页 |
| 3.3.3 ELISA测定 146S粒子含量 | 第35页 |
| 3.3.4 FMDV酸稳定性测定试验 | 第35-36页 |
| 3.3.5 FMDV热稳定性测定 | 第36页 |
| 3.3.6 突变病毒遗传稳定性测定 | 第36页 |
| 3.3.7 突变病毒部分结构蛋白同源模建分析 | 第36页 |
| 3.4 结果 | 第36-41页 |
| 3.4.1 三株FMDV酸稳定性测定结果 | 第36-38页 |
| 3.4.2 三株FMDV热稳定性测定结果 | 第38页 |
| 3.4.3 突变病毒遗传稳定性测定结果 | 第38-40页 |
| 3.4.4 突变病毒结构蛋白同源模建结果 | 第40-41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-43页 |
| 3.5.1 影响FMDV稳定性的氨基酸位点不唯一 | 第41-42页 |
| 3.5.2 FMDV结构蛋白同源模建 | 第42-43页 |
| 第四章 全文结论 | 第43-44页 |
| 4.1 试验结论 | 第43页 |
| 4.2 下一步工作的设想 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简历 | 第50页 |
