| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 农药残留检测技术研究综述 | 第15-47页 |
| 1 免疫分析方法概述 | 第16页 |
| 2 农药等小分子化合物抗原制备研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1 半抗原合成 | 第17-18页 |
| 2.2 人工抗原制备 | 第18-19页 |
| 3 农药等小分子化合物抗体制备研究进展 | 第19-24页 |
| 3.1 多克隆抗体 | 第20页 |
| 3.2 单克隆抗体 | 第20-21页 |
| 3.3 基因工程抗体 | 第21-23页 |
| 3.4 仿生抗体 | 第23-24页 |
| 4 噬菌体展示技术在免疫分析中的研究进展 | 第24-26页 |
| 4.1 应用于单链抗体表达 | 第25页 |
| 4.2 应用于噬菌体抗体库构建 | 第25-26页 |
| 4.3 应用于噬菌体多肽竞争物库构建 | 第26页 |
| 5 农药残留免疫分析方法质量控制 | 第26-28页 |
| 5.1 精密度 | 第26页 |
| 5.2 灵敏度 | 第26-27页 |
| 5.3 准确度 | 第27页 |
| 5.4 特异性 | 第27页 |
| 5.5 稳定性 | 第27页 |
| 5.6 样品基质效应 | 第27-28页 |
| 6 农药残留免疫分析方法研究进展 | 第28-40页 |
| 6.1 放射免疫分析 | 第28页 |
| 6.2 酶联免疫吸附分析 | 第28-30页 |
| 6.3 化学发光免疫分析 | 第30-31页 |
| 6.4 荧光免疫分析 | 第31-36页 |
| 6.5 试纸条免疫层析分析 | 第36-38页 |
| 6.6 多残留免疫分析 | 第38-40页 |
| 6.7 其他免疫分析 | 第40页 |
| 7 新烟碱类杀虫剂残留分析检测现状 | 第40-42页 |
| 7.1 新烟碱类杀虫剂概况 | 第40-41页 |
| 7.2 新烟碱类杀虫剂残留检测概况 | 第41-42页 |
| 8 噻虫胺残留分析检测现状 | 第42-44页 |
| 8.1 噻虫胺概况 | 第42-44页 |
| 8.2 噻虫胺残留检测概况 | 第44页 |
| 9 研究目的和意义 | 第44-47页 |
| 第二章 噻虫胺抗原和抗体制备 | 第47-91页 |
| 第一节 噻虫胺半抗原和人工抗原制备 | 第48-54页 |
| 1 实验材料 | 第48-49页 |
| 1.1 主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-51页 |
| 2.1 半抗原的合成与鉴定 | 第49页 |
| 2.2 人工抗原的制备与鉴定 | 第49-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-54页 |
| 3.1 半抗原分子的结构鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2 人工抗原偶联物结合比的测定 | 第52-54页 |
| 第二节 噻虫胺多克隆抗体(PcAb)制备 | 第54-58页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 主要试剂 | 第54页 |
| 1.2 主要仪器 | 第54页 |
| 1.3 缓冲溶液 | 第54-55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| 2.1 新西兰大白兔免疫 | 第55页 |
| 2.2 采血与测定 | 第55-56页 |
| 2.3 抗体效价测定 | 第56页 |
| 2.4 多克隆抗体纯化 | 第56页 |
| 2.5 抗体亲和力测定 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-58页 |
| 3.1 多克隆抗体效价 | 第57页 |
| 3.2 多克隆抗体亲和力 | 第57-58页 |
| 第三节 噻虫胺单克隆抗体(McAb)制备 | 第58-66页 |
| 1 实验材料 | 第58-59页 |
| 1.1 主要试剂 | 第58页 |
| 1.2 主要仪器和生物材料 | 第58-59页 |
| 1.3 缓冲溶液 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-64页 |
| 2.1 BALB/c小白鼠免疫 | 第59-60页 |
| 2.2 效价测定与选择 | 第60页 |
| 2.3 杂交瘤细胞的制备 | 第60-63页 |
| 2.4 细胞冻存和复苏 | 第63页 |
| 2.5 小鼠腹水的制备 | 第63页 |
| 2.6 抗体纯化 | 第63页 |
| 2.7 单克隆抗体亚型鉴定 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 3.1 免疫脾细胞提供小白鼠选择 | 第64页 |
| 3.2 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.3 单克隆抗体效价 | 第65页 |
| 3.4 单克隆抗体亲和力 | 第65-66页 |
| 第四节 噻虫胺噬菌体单链抗体制备 | 第66-91页 |
| 1 实验材料 | 第66-67页 |
| 1.1 主要试剂 | 第66页 |
| 1.2 主要仪器 | 第66-67页 |
| 1.3 菌株及质粒 | 第67页 |
| 1.4 缓冲溶液 | 第67页 |
| 2 实验方法 | 第67-80页 |
| 2.1 杂交瘤细胞株总mRNA的提取 | 第67-68页 |
| 2.2 逆转录合成cDNA | 第68页 |
| 2.3 引物序列 | 第68-69页 |
| 2.4 抗体可变基因扩增 | 第69-72页 |
| 2.5 T载体构建 | 第72-74页 |
| 2.6 T载体(酶切位点)构建 | 第74-75页 |
| 2.7 电转化感受态细胞制备 | 第75页 |
| 2.8 噬菌粒pComb3XSS扩增 | 第75-76页 |
| 2.9 辅助噬菌体扩增 | 第76页 |
| 2.10 噬菌粒表达载体构建 | 第76-79页 |
| 2.11 噬菌体单链抗体表达与纯化 | 第79页 |
| 2.12 噬菌体单链抗体特异性和亲和性测定 | 第79页 |
| 2.13 噬菌体单链抗体基因序列测定 | 第79页 |
| 2.14 噬菌体单链抗体大量制备 | 第79-80页 |
| 3 结果与分析 | 第80-88页 |
| 3.1 杂交瘤细胞总mRNA的提取和鉴定 | 第80页 |
| 3.2 抗体V_H、V_L和Linker基因扩增 | 第80-81页 |
| 3.3 抗体ScFv基因扩增 | 第81-82页 |
| 3.4 抗体ScFv基因的T载体构建 | 第82-83页 |
| 3.5 抗体ScFv(SfiI酶切位点)基因扩增 | 第83页 |
| 3.6 抗体ScFv(SfiI酶切位点)基因的T载体构建 | 第83-84页 |
| 3.7 基因的SfiI酶酶切 | 第84-85页 |
| 3.8 噬菌粒表达载体验证 | 第85-86页 |
| 3.9 噬菌粒表达质粒ScFv(SfiI)基因片段测序 | 第86-87页 |
| 3.10 噬菌体单链抗体大量表达和滴度 | 第87页 |
| 3.11 噬菌体单链抗体的亲和性 | 第87-88页 |
| 4 本章结论与讨论 | 第88-91页 |
| 第三章 噻虫胺酶联免疫吸附分析方法研究 | 第91-121页 |
| 1 实验材料 | 第92-93页 |
| 1.1 主要试剂 | 第92页 |
| 1.2 主要仪器 | 第92-93页 |
| 1.3 缓冲溶液 | 第93页 |
| 第一节 基于多克隆抗体的噻虫胺ELISA方法研究 | 第93-108页 |
| 2 实验方法 | 第93-96页 |
| 2.1 噻虫胺酶标抗原制备 | 第93-94页 |
| 2.2 ELISA操作程序 | 第94页 |
| 2.3 免疫反应条件优化 | 第94-95页 |
| 2.4 标准曲线建立 | 第95页 |
| 2.5 交叉反应率测定 | 第95-96页 |
| 2.6 添加回收率测定 | 第96页 |
| 2.7 样品基质效应测定 | 第96页 |
| 2.8 真实样品测定 | 第96页 |
| 3 结果与分析 | 第96-108页 |
| 3.1 酶标抗原结合比测定 | 第96-97页 |
| 3.2 噻虫胺ELISA法条件优化 | 第97-101页 |
| 3.3 灵敏度 | 第101-102页 |
| 3.4 精密度 | 第102页 |
| 3.5 抗体特异性 | 第102-103页 |
| 3.6 基质效应评价 | 第103-105页 |
| 3.7 添加回收率 | 第105-106页 |
| 3.8 真实样品测定结果验证 | 第106-108页 |
| 第二节 基于单克隆抗体和噬菌体单链抗体的噻虫胺ELISA方法研究 | 第108-121页 |
| 2 实验方法 | 第108-109页 |
| 2.1 间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ELISA)操作程序 | 第108页 |
| 2.2 免疫反应条件优化 | 第108页 |
| 2.3 标准曲线建立与交叉反应率测定 | 第108-109页 |
| 2.4 添加回收率测定 | 第109页 |
| 2.5 样品基质效应实验 | 第109页 |
| 2.6 真实样品分析 | 第109页 |
| 3 结果与分析 | 第109-119页 |
| 3.1 噻虫胺ELISA法条件优化 | 第109-113页 |
| 3.2 灵敏度 | 第113页 |
| 3.3 抗体特异性 | 第113-115页 |
| 3.4 基质效应评价 | 第115-116页 |
| 3.5 添加回收率 | 第116-117页 |
| 3.6 方法相关性验证 | 第117-119页 |
| 4 本章结论与讨论 | 第119-121页 |
| 第四章 噻虫胺化学发光酶免疫分析方法研究 | 第121-135页 |
| 1 实验材料与方法 | 第122-125页 |
| 1.1 实验材料 | 第122-123页 |
| 1.2 实验方法 | 第123-125页 |
| 2 结果与分析 | 第125-132页 |
| 2.1 化学发光发射波谱曲线和动力曲线 | 第125-126页 |
| 2.2 CLEIA法条件优化 | 第126-129页 |
| 2.3 灵敏度 | 第129页 |
| 2.4 特异性 | 第129-130页 |
| 2.5 添加回收率 | 第130-131页 |
| 2.6 真实样品测定结果验证 | 第131-132页 |
| 3 本章结论与讨论 | 第132-135页 |
| 第五章 噻虫胺时间分辨荧光免疫分析方法研究 | 第135-149页 |
| 1 实验材料与方法 | 第136-138页 |
| 1.1 实验材料 | 第136-137页 |
| 1.2 实验方法 | 第137-138页 |
| 2 结果与分析 | 第138-146页 |
| 2.1 铕标记物制备与纯化 | 第138-139页 |
| 2.2 荧光波谱 | 第139-140页 |
| 2.3 TRFIA法条件优化 | 第140-143页 |
| 2.4 灵敏度 | 第143-144页 |
| 2.5 特异性 | 第144-145页 |
| 2.6 添加回收率 | 第145-146页 |
| 2.7 真实样品测定结果验证 | 第146页 |
| 3 本章结论与讨论 | 第146-149页 |
| 第六章 量子点荧光免疫分析方法研究 | 第149-161页 |
| 1 实验材料与方法 | 第150-153页 |
| 1.1 实验材料 | 第150-151页 |
| 1.2 实验方法 | 第151-153页 |
| 2 结果与分析 | 第153-159页 |
| 2.1 量子点标记抗体的荧光波谱 | 第153页 |
| 2.2 FLISA条件优化 | 第153-156页 |
| 2.3 灵敏度 | 第156-157页 |
| 2.4 特异性 | 第157页 |
| 2.5 添加回收率与方法的精密度 | 第157-158页 |
| 2.6 实际样品检测和相关性验证 | 第158-159页 |
| 3 本章结论与讨论 | 第159-161页 |
| 第七章 噻虫胺荧光偏振免疫分析方法研究 | 第161-175页 |
| 1 实验材料与方法 | 第162-165页 |
| 1.1 实验材料 | 第162-163页 |
| 1.2 实验方法 | 第163-165页 |
| 2 结果与分析 | 第165-172页 |
| 2.1 荧光示踪物鉴定 | 第165-167页 |
| 2.2 FPIA法工作缓冲液条件优化 | 第167-169页 |
| 2.3 灵敏度 | 第169页 |
| 2.4 特异性 | 第169-170页 |
| 2.5 添加回收率 | 第170-171页 |
| 2.6 相关性验证 | 第171-172页 |
| 3 本章结论与讨论 | 第172-175页 |
| 第八章 噻虫胺金标试纸条免疫层析分析方法研究 | 第175-193页 |
| 1 实验材料与方法 | 第176-180页 |
| 1.1 实验材料 | 第176-177页 |
| 1.2 实验方法 | 第177-180页 |
| 2 结果与分析 | 第180-190页 |
| 2.1 胶体金颗粒鉴定 | 第180-182页 |
| 2.2 胶体金标记单克隆抗体 | 第182-183页 |
| 2.3 免疫层析分析优化 | 第183-185页 |
| 2.4 试纸条灵敏度 | 第185-186页 |
| 2.5 试纸条特异性 | 第186-187页 |
| 2.6 试纸条稳定性 | 第187页 |
| 2.7 基质效应评价 | 第187-188页 |
| 2.8 添加回收率 | 第188-189页 |
| 2.9 真实样品测定结果验证 | 第189-190页 |
| 3 本章结论与讨论 | 第190-193页 |
| 全文主要结论与讨论 | 第193-197页 |
| 参考文献 | 第197-213页 |
| 附录:缓冲液及培养液配制 | 第213-219页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和申请的专利与项目 | 第219-221页 |
| 致谢 | 第221页 |
