| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-21页 |
| 上篇 文献综述 | 第21-64页 |
| 第一章 稻瘟病菌功能基因研究进展 | 第22-40页 |
| 1. 稻瘟病概述 | 第22页 |
| 2. 稻瘟病菌及其特征 | 第22-23页 |
| 3. 稻瘟病侵染循环 | 第23-32页 |
| ·分生孢子的形成和传播 | 第23-26页 |
| ·侵染 | 第26页 |
| ·附着胞 | 第26-28页 |
| ·萌发和附着胞形成过程中的信号反应 | 第28-29页 |
| ·次生代谢与寄主定殖 | 第29-30页 |
| ·蛋白效应因子与寄主定殖 | 第30页 |
| ·寄主细胞间的生长 | 第30-31页 |
| ·无毒基因 | 第31-32页 |
| 4. 总结与展望 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-40页 |
| 第二章 过氧化物酶体及其生物学研究 | 第40-64页 |
| 1. 过氧化物酶体是如何产生的 | 第40-41页 |
| 2. 过氧化物酶体在内质网上形成 | 第41-42页 |
| 3. 过氧化物酶体前体 | 第42页 |
| 4. 如何从ER上脱落 | 第42-44页 |
| 5. 成熟的过氧化物酶体 | 第44-48页 |
| 6. 分裂 | 第48-50页 |
| 7. 遗传 | 第50页 |
| 8. 疾病 | 第50-52页 |
| 9. 进化历程 | 第52-53页 |
| 10. 总结与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 下篇 研究内容 | 第64-144页 |
| 第一章 稻瘟病菌过氧化物酶体膜蛋白受体基因MOPEX19的功能分析 | 第65-93页 |
| 1. 材料与方法 | 第68-71页 |
| ·菌株与培养条件 | 第68页 |
| ·生物信息学分析 | 第68页 |
| ·核酸操作及Southern杂交 | 第68页 |
| ·酵母互补 | 第68-69页 |
| ·MoPEX19敲除及突变体恢复 | 第69页 |
| ·GFP融合表达载体的构建 | 第69页 |
| ·分生孢子萌发与附着胞形成观察、附着胞膨压测定 | 第69-71页 |
| ·致病性检测及侵染结构的观察 | 第71页 |
| ·过氧化氢、甲基紫精、刚果红耐受性检测 | 第71页 |
| ·荧光显微镜和透射电子显微镜 | 第71页 |
| 2. 结果 | 第71-85页 |
| ·MoPEX19基因的鉴定 | 第71-72页 |
| ·MoPEX19的表达及亚细胞定位 | 第72页 |
| ·MoPEX19的敲除与恢复 | 第72-74页 |
| ·MoPEX19的敲除影响过氧化物酶体基质蛋白及膜蛋白的正确定位 | 第74-77页 |
| ·MoPEX19的敲除导致过氧化物酶体与伏鲁宁体的消失 | 第77页 |
| ·MoPEX19的敲除影响脂类代谢及活性氧的抗性 | 第77-81页 |
| ·MoPEX19参与病菌的营养生长及分生孢子形成 | 第81-83页 |
| ·MoPEX19是分生孢子萌发、附着胞形成以及膨压产生所必需的 | 第83页 |
| ·MoPEX19的敲除影响细胞壁强度 | 第83页 |
| ·MoPEX19为稻瘟病菌致病过程所必需 | 第83-85页 |
| 3. 讨论 | 第85-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 第二章 稻瘟病菌过氧化物酶体增殖因子MOPEX11A,B,C家族的功能分析 | 第93-130页 |
| 1. 材料与方法 | 第96-102页 |
| ·菌株与培养条件 | 第96-97页 |
| ·菌株的保存与培养 | 第97页 |
| ·多序列联配和系统进化树构建 | 第97页 |
| ·稻瘟病菌DNA、RNA以及cDNA的制备 | 第97-98页 |
| ·稻瘟病菌DNA提取 | 第97页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体RNA提取 | 第97页 |
| ·稻瘟病菌和水稻互作不同时期的RNA提取 | 第97-98页 |
| ·cDNA的制备 | 第98页 |
| ·GFP融合表达载体的构建 | 第98页 |
| ·MoPEX11A,B,C敲除及突变体回复 | 第98-100页 |
| ·稻瘟病菌MoPEX11A,B,C敲除载体的构建与突变体的获得 | 第98-99页 |
| ·稻瘟病菌MoPEX11A,B突变体的回复 | 第99-100页 |
| ·分生孢子萌发与附着胞形成观察、附着胞膨压与细胞壁完整性检测 | 第100页 |
| ·致病性检测及侵染结构的观察 | 第100页 |
| ·荧光显微镜和透射电子显微镜 | 第100页 |
| ·稻瘟病菌的有性杂交 | 第100-102页 |
| 2. 研究结果 | 第102-125页 |
| ·稻瘟病菌中MoPEX11A,B,C基因的确定与克隆 | 第102页 |
| ·MoPEX11基因家族的序列与同源基因分析 | 第102-109页 |
| ·MoPEX11A序列 | 第102-104页 |
| ·MoPEX11A的同源基因 | 第104页 |
| ·MoPEX11B基因序列 | 第104-105页 |
| ·MoPEX11B的同源基因 | 第105-106页 |
| ·MoPEX11C基因的序列 | 第106-107页 |
| ·MoPEX11C的同源基因 | 第107-108页 |
| ·MoPEX11A,B,C同源基因聚类分析 | 第108-109页 |
| ·MoPEX11A,B,C基因敲除与突变体验证 | 第109页 |
| ·突变体回复 | 第109-110页 |
| ·MoPEX11A,B,C家族表达模式与蛋白定位分析 | 第110-112页 |
| ·MoPEX11A,B,C在孢子、菌丝及附着胞中的表达 | 第110-112页 |
| ·MoPEX11A,B,C基因的亚细胞定位 | 第112页 |
| ·MoPEX11A影响过氧化物酶体的数量和大小 | 第112-114页 |
| ·MoPEX11A的缺失影响伏鲁宁体的正常脱落 | 第114-116页 |
| ·过量表达MoPEX11A导致过氧化物酶体分裂受阻 | 第116页 |
| ·MoPEX11A缺失导致稻瘟病菌致病性降低 | 第116-118页 |
| ·MoPEX11A缺失降低分生孢子萌发率、附着胞形成率 | 第118页 |
| ·MoPEX11A缺失降低附着胞膨压以及侵染率 | 第118页 |
| ·MoPEX11A影响细胞壁的完整性 | 第118-120页 |
| ·MoPEX11A,B,C双敲及三敲转化子的获得 | 第120-121页 |
| ·MoPEX11A及MoPEX11C影响稻瘟病菌脂肪酸利用率 | 第121-122页 |
| ·有性生殖 | 第122页 |
| ·单敲、双敲、三敲突变体致病性检测 | 第122-123页 |
| ·MoPEX11A,B,C敲除对相关基因表达的影响 | 第123-125页 |
| ·MoPEX11A,B,C敲除后对彼此表达量的影响 | 第123-124页 |
| ·MoPEX11A,B,C敲除对其他PEX基因的影响 | 第124页 |
| ·MoPEX11A,B,C敲除对上下游基因的影响 | 第124-125页 |
| 3. 小结与讨论 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-130页 |
| 第三章 稻瘟病菌Pex14p,Pmp4p,Pmp47p的表达与定位 | 第130-144页 |
| 1. 材料方法 | 第133-134页 |
| ·菌株及其生长条件 | 第133页 |
| ·载体构建 | 第133-134页 |
| ·真菌转化 | 第134页 |
| ·荧光显微观察 | 第134页 |
| 2. 结果 | 第134-139页 |
| ·eGFP融合表达载体的构建 | 第134-135页 |
| ·MoPEX14与MoPMP47在野生型菌株中呈现明显的点状定位 | 第135页 |
| ·MoPEX14,MoPMP47与PTS1信号的共定位 | 第135-136页 |
| ·过氧化物酶体膜蛋白MoPEX14,MoPMP47与线粒体的共定位 | 第136-137页 |
| ·过氧化物酶体膜蛋白与伏鲁宁体蛋白Hex1的共定位 | 第137-138页 |
| ·MoPEX5,MoPEX6,MoPEX7缺失对MoPEX14,MoPMP47与MoPMP4定位的影响 | 第138页 |
| ·Δmopex19突变体中MoPEX14基因仍呈现点状定位 | 第138-139页 |
| 3. 小结与讨论 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-144页 |
| 附录 稻瘟病菌DEXD/H-box家族20个基因的敲除及其中1个基因的沉默 | 第144-170页 |
| 1. 材料与方法 | 第147-150页 |
| ·供试菌株 | 第147-148页 |
| ·基因的鉴定与克隆 | 第148页 |
| ·DExD/H-box家族20个基因上下游序列的获得 | 第148页 |
| ·DExD/H-box家族20个基因置换载体的构建及AtMT转化 | 第148页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第148页 |
| ·MoVRD1基因沉默载体的构建 | 第148-149页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子的筛选及验证 | 第149页 |
| ·表型分析 | 第149-150页 |
| ·菌丝干重统计 | 第149页 |
| ·生长速率与分生孢子产量 | 第149页 |
| ·分生孢子萌发率及附着胞形成率统计 | 第149-150页 |
| ·致病性分析 | 第150页 |
| ·稻瘟病菌有性生殖 | 第150页 |
| 2. 结果分析 | 第150-163页 |
| ·DExD/H-box家族20个基因的筛选及获得 | 第150-151页 |
| ·DExD/H-box家族20个基因敲除载体的获得 | 第151页 |
| ·DExD/H-box家族20个基因敲除突变体的获得及验证 | 第151-152页 |
| ·MoDD1突变体初步表型分析 | 第152-153页 |
| ·菌落形态与致病性测定 | 第152页 |
| ·温度敏感性测定 | 第152-153页 |
| ·MoDD2菌落形态与致病性测定 | 第153-154页 |
| ·MoVRD1 RNAi沉默载体及转化子的获得 | 第154页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子的菌落状态 | 第154-155页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子致病性初步验证 | 第155页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子表型分析 | 第155-163页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子菌落形态 | 第155-156页 |
| ·MoVRD1基因沉默转化子的验证 | 第156-158页 |
| ·Ⅰ,Ⅱ类MoVRD1基因沉默转化子菌丝干重降低 | 第158-159页 |
| ·Ⅱ,Ⅱ类MoVRD1基因沉默转化子分生孢子形态改变 | 第159页 |
| ·Ⅰ,Ⅱ类MoVRD1基因沉默转化子分生孢子产量降低 | 第159-161页 |
| ·Ⅰ,Ⅱ类MoVRD1基因沉默转化子分生孢子萌发率与附着胞形成率降低 | 第161-162页 |
| ·Ⅰ,Ⅱ类MOVRD1基因沉默转化子有性生殖受到影响 | 第162页 |
| ·Ⅱ类MoVRD1基因沉默转化子对多菌灵抗性增加 | 第162-163页 |
| 3. 小结与讨论 | 第163-167页 |
| 参考文献 | 第167-170页 |
| 全文总结与讨论 | 第170-171页 |
| 本论文创新点 | 第171-172页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第172-173页 |
| 致谢 | 第173页 |
