紫花苜蓿MsHST基因的克隆及拟南芥的遗传转化
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| abstract | 第4-12页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| ·紫花苜蓿关于转基因的研究 | 第12-16页 |
| ·紫花苜蓿转抗氧化基因 | 第12-13页 |
| ·紫花苜蓿转抗盐碱基因 | 第13页 |
| ·紫花苜蓿转抗寒及抗旱基因 | 第13-14页 |
| ·紫花苜蓿转耐酸铝胁迫基因 | 第14页 |
| ·紫花苜蓿转抗病抗虫基因 | 第14-15页 |
| ·紫花苜蓿转品质改良基因 | 第15-16页 |
| ·植物基因克隆 | 第16-17页 |
| ·PCR扩增 | 第16页 |
| ·Gateway克隆技术 | 第16页 |
| ·电子克隆 | 第16-17页 |
| ·mRNA差别显示技术 | 第17页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第17页 |
| ·HST基因研究进展 | 第17-18页 |
| ·本实验研究目的,意义及内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的、意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-20页 |
| 2 MsHST基因的克隆及序列分析 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·培养液及培养基 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-24页 |
| ·实验种子的萌发 | 第20-21页 |
| ·实验材料总RNA的提取 | 第21页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第21-22页 |
| ·MsHST基因PCR扩增 | 第22页 |
| ·PCR产物的切胶回收 | 第22-23页 |
| ·克隆载体与目的片段连接 | 第23页 |
| ·筛取阳性克隆及菌体PCR鉴定 | 第23-24页 |
| ·克隆结果与分析 | 第24-29页 |
| ·提取紫花苜蓿总的RNA | 第24页 |
| ·紫花苜蓿MsHST基因的获得 | 第24-25页 |
| ·菌体PCR检测 | 第25页 |
| ·MsHST基因的cDNA全序列的获得及序列分析 | 第25-28页 |
| ·MsHST的二级结构分析 | 第28页 |
| ·亚细胞定位预测及跨膜分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 3 MsHST表达载体的构建及转化 | 第30-35页 |
| ·材料与试剂 | 第30页 |
| ·植物材料、菌体及载体 | 第30页 |
| ·酶和生化试剂 | 第30页 |
| ·试验仪器 | 第30页 |
| ·培养基的配置 | 第30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·载体的构建和转化 | 第30-32页 |
| ·DNA片段的制备 | 第30-31页 |
| ·线性化载体的制备 | 第31页 |
| ·pBI-MsHST表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·结果分析 | 第32-33页 |
| ·载体构建 | 第32-33页 |
| ·pBI-MsHST表达载体的构建及检测 | 第33页 |
| ·讨论与小结 | 第33-35页 |
| 4 MsHST表达分析 | 第35-40页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂及仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·引物设计合成 | 第35页 |
| ·材料处理及获取 | 第35页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·MsHST组织差异性 | 第36-37页 |
| ·外源激素ABA对MsHST表达量的影响 | 第37页 |
| ·MsHST基因在不同生长期叶中表达 | 第37-38页 |
| ·外源激素GA3对MsHST表达量的影响 | 第38页 |
| ·讨论及小结 | 第38-40页 |
| 5 MsHST转基因及再生植株检测 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料的准备及获取 | 第40页 |
| ·菌株和载体质粒 | 第40页 |
| ·生化试剂及溶液配制 | 第40页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·转化方法 | 第41-43页 |
| ·农杆菌的转化及其鉴定 | 第41页 |
| ·花序侵染法转化拟南芥 | 第41页 |
| ·鉴定转基因拟南芥 | 第41-43页 |
| ·GUS化学染色 | 第43页 |
| ·结果分析 | 第43-45页 |
| ·pBI-MsHST农杆菌转化 | 第43页 |
| ·获取转基因拟南芥 | 第43-44页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第44页 |
| ·转基因植株RT-PCR检测 | 第44-45页 |
| ·GUS染色 | 第45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-46页 |
| 6 MsHST转基因植株的生理指标检测 | 第46-50页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·植物材料 | 第46页 |
| ·生化试剂及仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·叶片收集 | 第46页 |
| ·叶绿素的提取 | 第46页 |
| ·叶绿素指标测定 | 第46-47页 |
| ·数据处理 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-49页 |
| ·材料收集 | 第47页 |
| ·叶绿素a含量的比较 | 第47-48页 |
| ·叶绿素b含量的比较 | 第48页 |
| ·叶绿素含量的比较 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 7 全文结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
