| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第11-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-38页 |
| ·一氧化氮的生物合成与代谢 | 第18-20页 |
| ·一氧化氮研究的历史与现状 | 第18-19页 |
| ·一氧化氮的生物合成 | 第19页 |
| ·一氧化氮的生物代谢 | 第19-20页 |
| ·一氧化氮与蛋白质的修饰及其检测 | 第20-25页 |
| ·蛋白质的亚硝基化 | 第20-23页 |
| ·亚硝基化的检测 | 第23-25页 |
| ·蛋白质的硝基化简介 | 第25页 |
| ·帕金森病的研究进展与蛋白质的氧化修饰 | 第25-33页 |
| ·帕金森病的研究进展 | 第25-29页 |
| ·帕金森病多巴胺神经元凋亡的研究 | 第29-30页 |
| ·帕金森病中的氧化和硝化应力 | 第30-33页 |
| ·帕金森病中蛋白质的亚硝基化修饰 | 第33页 |
| ·帕金森病多巴胺神经元研究模型介绍 | 第33-34页 |
| ·增殖细胞核抗原简介 | 第34-35页 |
| ·PCNA的基本功能 | 第34页 |
| ·PCNA与细胞凋亡 | 第34-35页 |
| ·PCNA的蛋白质相互作用 | 第35页 |
| ·PCNA的亚硝基化与多巴胺神经元凋亡模型的研究假设 | 第35页 |
| ·半胱天冬蛋白酶家族与细胞凋亡 | 第35-38页 |
| 第二章 帕金森病多巴胺神经元研究模型的构建与亚硝基化蛋白质组分析策略的建立 | 第38-54页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-45页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·细胞系 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40页 |
| ·主要分析软件 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·PD多巴胺神经元模型的建立 | 第40-41页 |
| ·细胞内一氧化氮的检测 | 第41页 |
| ·线粒体膜电位的检测 | 第41-42页 |
| ·线粒体内ATP水平的检测 | 第42页 |
| ·线粒体的差速离心法富集 | 第42-43页 |
| ·蛋白质的提取 | 第43页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第43-44页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| ·Western Blot | 第44页 |
| ·CyDye switch法标记蛋白质样本 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的考马斯亮蓝染色 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-52页 |
| ·鱼藤酮处理引起SH-SY5Y细胞内NO水平升高 | 第45-46页 |
| ·鱼藤酮处理引起SH-SY5Y细胞形态改变 | 第46-47页 |
| ·鱼藤酮处理引起SH-SY5Y细胞发生凋亡现象 | 第47-48页 |
| ·鱼藤酮处理引起SH-SY5Y细胞线粒体内ATP水平降低 | 第48-49页 |
| ·差速离心法富集线粒体后的纯度检测 | 第48页 |
| ·线粒体ATP水平检测 | 第48-49页 |
| ·亚硝基化蛋白质组分析方法的建立 | 第49-52页 |
| ·CyDye switch方法的基本原理 | 第49-50页 |
| ·CyDye switch方法特异性的检测 | 第50页 |
| ·CyDye switch方法的测试 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第三章 帕金森病多巴胺神经元模型的亚硝基化蛋白质组定量分析 | 第54-66页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-58页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·主要实验仪器 | 第55页 |
| ·主要分析软件 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·等点聚焦电泳 | 第55-56页 |
| ·第二维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第56页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的硝酸银染色 | 第56-57页 |
| ·荧光胶图分析 | 第57页 |
| ·蛋白质斑点的胶内消化 | 第57页 |
| ·蛋白质的质谱鉴定 | 第57-58页 |
| ·生物素置换法 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-64页 |
| ·PD多巴胺神经元模型的亚硝基化蛋白质组定量分析与鉴定 | 第58-62页 |
| ·生物素置换法验证亚硝基化差异蛋白 | 第62-64页 |
| ·生物素置换法特异性测试 | 第63-64页 |
| ·硝基化差异蛋白质的验证 | 第64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 第四章 帕金森病多巴胺神经元模型中PCNA亚硝基化对其功能的影响 | 第66-94页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·材料与方法 | 第66-77页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·细胞系 | 第67页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第67页 |
| ·质粒 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·主要实验仪器 | 第68页 |
| ·主要分析软件 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-77页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第68页 |
| ·逆转录PCR | 第68-69页 |
| ·目的基因的扩增 | 第69页 |
| ·质粒的提取 | 第69-70页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第70页 |
| ·目的基因的定向克隆与鉴定 | 第70-71页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第71页 |
| ·细菌的转化 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第72页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第72页 |
| ·抗原亲和层析纯化抗体 | 第72-73页 |
| ·细胞质与细胞核的富集 | 第73页 |
| ·免疫共沉淀 | 第73-75页 |
| ·免疫荧光染色与激光共聚焦显微镜观察 | 第75页 |
| ·蛋白质的液体消化 | 第75-76页 |
| ·体外亚硝化半胱氨酸(SNOC)处理蛋白溶液 | 第76页 |
| ·质谱检测PCNA硝基化位点 | 第76页 |
| ·重组蛋白的定点突变 | 第76-77页 |
| ·Pull-down实验 | 第77页 |
| ·Caspase9体外剪切测试 | 第77页 |
| ·实验结果 | 第77-93页 |
| ·PCNA重组蛋白质的原核表达与纯化 | 第77-78页 |
| ·PCNA特异性抗体的制备 | 第78-79页 |
| ·PCNA SH-SY5Y细胞中的亚细胞定位 | 第79-80页 |
| ·PCNA在SH-SY5Y细胞质中的潜在相互作用蛋白 | 第80-82页 |
| ·PCNA与caspase9的相互作用受NO应力水平影响 | 第82-83页 |
| ·Caspase9的亚硝基化状态分析 | 第83-84页 |
| ·重组PCNA体外亚硝基化修饰位点鉴定 | 第84-86页 |
| ·SH-SY5Y细胞中PCNA亚硝基化位点的检测 | 第86-88页 |
| ·PCNA经过SNOC修饰后与Caspase9相互作用分析 | 第88-90页 |
| ·亚硝基化对PCNA结构的影响 | 第90-92页 |
| ·重组PCNA Caspase9剪切激活的影响 | 第92-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 第五章 讨论 | 第94-100页 |
| ·CyDye switch/2D-DIGE策略检测蛋白质亚硝基化 | 第94-95页 |
| ·本研究模型中亚硝基化差异蛋白质参与多种生物过程 | 第95-96页 |
| ·PCNA的翻译后修饰 | 第96-98页 |
| ·翻译后修饰对PCNA的调节 | 第96-97页 |
| ·PCNA硝基化位点的结构特点 | 第97-98页 |
| ·Caspase9的调节机制 | 第98-100页 |
| 基本结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第112-113页 |
