| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-52页 |
| 第一章 综述 | 第19-52页 |
| 第一节 猪瘟病毒研究进展 | 第19-35页 |
| 1. 猪瘟的流行特点 | 第19-20页 |
| 2. 猪瘟病毒的基因组结构及其编码蛋白的功能 | 第20-30页 |
| ·5’非编码区 | 第21-22页 |
| ·N~(pro)蛋白 | 第22-24页 |
| ·核衣壳C蛋白 | 第24页 |
| ·E~(rns)蛋白 | 第24-25页 |
| ·E1蛋白 | 第25-26页 |
| ·E2蛋白 | 第26-28页 |
| ·P7蛋白 | 第28页 |
| ·NS2和NS3蛋白 | 第28-29页 |
| ·NS4A和NS4B蛋白 | 第29页 |
| ·NS5A和NS5B蛋白 | 第29页 |
| ·3’非编码区 | 第29-30页 |
| 3. 猪瘟病毒的致病机制 | 第30-35页 |
| ·猪瘟病毒的细胞受体 | 第30-31页 |
| ·猪瘟病毒感染对靶细胞的影响 | 第31-32页 |
| ·猪瘟病毒感染引起的免疫抑制机制 | 第32-35页 |
| ·猪瘟病毒感染引起宿主免疫抑制的原因 | 第32-33页 |
| ·猪瘟病毒感染抑制细胞病变的产生 | 第33页 |
| ·猪瘟病毒感染引起树突状细胞无应答 | 第33-34页 |
| ·猪瘟病毒感染抑制Ⅰ型干扰素产生 | 第34-35页 |
| ·猪瘟病毒感染引起细胞因子表达的变化 | 第35页 |
| 第二节 病毒干扰MHC类分子抗原递呈的策略 | 第35-45页 |
| 1. MHC类分子及其分子伴侣和共刺激分子的结构和功能 | 第36-41页 |
| ·MHC类分子的结构和功能 | 第36-38页 |
| ·MHC Ⅰ类分子 | 第36页 |
| ·MHC Ⅱ类分子 | 第36-38页 |
| ·MHC类分子在抗原递呈途径中重要的分子伴侣结构及其功能 | 第38-40页 |
| ·TAP | 第39页 |
| ·Ii链 | 第39-40页 |
| ·共刺激分子的结构及其功能 | 第40-41页 |
| ·CD80和CD86 | 第40-41页 |
| ·CD40 | 第41页 |
| 2. 病毒干扰MHC类分子抗原递呈的策略 | 第41-45页 |
| ·病毒干扰MHC Ⅰ类分子抗原递呈的策略 | 第41-43页 |
| ·抑制MHC Ⅰ基因的转录 | 第42-43页 |
| ·降解新生的及细胞表面的MHC Ⅰ类分子 | 第43页 |
| ·阻断TAP功能 | 第43页 |
| ·病毒干扰MHC Ⅱ类分子抗原递呈的策略 | 第43-44页 |
| ·病毒干扰共刺激分子表达的策略 | 第44-45页 |
| 第三节 real-time PCR分析mRNA表达水平方法的研究进展 | 第45-50页 |
| 1. 背景介绍 | 第45-46页 |
| 2. Real-time PCR技术的特点 | 第46-47页 |
| ·准确定量 | 第46-47页 |
| ·高灵敏度和高特异性 | 第47页 |
| ·减少污染及检测自动化 | 第47页 |
| 3. Real-time PCR技术的应用 | 第47-50页 |
| ·Real-time PCR技术在生物学领域的基础研究 | 第47-48页 |
| ·Real-time PCR技术在医学领域的应用 | 第48-49页 |
| ·Real-time PCR技术在生态学领域的应用 | 第49-50页 |
| ·Real-time PCR技术在转基因生物检测中的应用 | 第50页 |
| 第四节 本研究的目的及意义 | 第50-52页 |
| 第二部分 试验研究 | 第52-124页 |
| 第二章 实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒感染宿主细胞免疫应答基因方法的建立和应用 | 第52-95页 |
| 1. 材料与方法 | 第54-68页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·细胞和病毒 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·抗体 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-68页 |
| ·实验方案 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56-58页 |
| ·溶液配制 | 第58-59页 |
| ·猪外周血淋巴细胞的分离培养 | 第59页 |
| ·猪瘟病毒培养方法 | 第59-60页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株和GXXJ01毒株感染滴度测定方法 | 第60页 |
| ·新城疫病毒感染滴度测定方法 | 第60页 |
| ·间接免疫荧光方法检测猪瘟病毒 | 第60-61页 |
| ·脂质体介导的polyⅠ：C转染PK-15细胞的方法 | 第61-62页 |
| ·外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第62页 |
| ·猪瘟病毒总RNA的提取 | 第62页 |
| ·提取的总RNA的鉴定 | 第62页 |
| ·Real-time RT-PCR方法的建立 | 第62-67页 |
| ·实验设计 | 第67-68页 |
| ·数据表示和统计分析 | 第68页 |
| 2. 结果 | 第68-90页 |
| ·引物特异性检测结果 | 第68-69页 |
| ·重组质粒目的基因测序结果 | 第69页 |
| ·Real-time PCR反应条件优化结果 | 第69-70页 |
| ·目的基因real-time PCR标准曲线构建的结果 | 第70-71页 |
| ·Real-time PCR最适读板温度的确定 | 第71-72页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株、GXXJ01毒株和新城疫病毒效价测定 | 第72-73页 |
| ·新城疫病毒感染后PK-15细胞中IFN-α和IFN-β mRNA的转录动态 | 第73-75页 |
| ·PolyⅠ：C转染后PK-15细胞中IFN-α和IFN-β mRNA的转录动态 | 第75-76页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中部分免疫应答基因mRNA转录动态 | 第76-90页 |
| ·猪瘟病毒感染后不同时间点的间接免疫荧光检测结果 | 第76-79页 |
| ·猪瘟病毒感染后的PK-15细胞样品中总RNA质量检测 | 第79-80页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中持家基因GAPDH的mRNA转录动态 | 第80-81页 |
| ·猪瘟病毒感染PK-15细胞后病毒基因组RNA定量检测结果 | 第81-82页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中SLA-2基因的mRNA转录动态 | 第82-83页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中TAP1基因的mRNA转录动态 | 第83-84页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中SLA-DR基因的mRNA转录动态 | 第84-85页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中Ii基因的mRNA转录动态 | 第85-86页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中CD40基因的mRNA转录动态 | 第86-87页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中CD80基因的mRNA转录动态 | 第87-88页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中CD86基因的mRNA转录动态 | 第88-89页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中IFN-α基因的mRNA转录动态 | 第89-90页 |
| ·猪瘟病毒感染后PK-15细胞中IFN-β基因的mRNA转录动态 | 第90页 |
| 3. 讨论 | 第90-94页 |
| 4. 小结 | 第94-95页 |
| 第三章 猪瘟病毒感染对PK=15细胞中SLA-DR表达的影响 | 第95-122页 |
| 1. 材料与方法 | 第96-106页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第96页 |
| ·抗体 | 第96-97页 |
| ·仪器 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-106页 |
| ·实验方案 | 第97页 |
| ·引物 | 第97-98页 |
| ·猪瘟病毒C、N~(pro)和E2基因的扩增 | 第98-101页 |
| ·猪瘟病毒C、N~(pro)和E2基因重组质粒的构建 | 第101页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第101-102页 |
| ·脂质体介导的真核表达质粒P-C、P-N~(pro)和P-E2转染PK-15细胞 | 第102-103页 |
| ·Real-time RT-PCR和Westeron blo方法检测转染真核表达质粒后PK-15细胞中SLA-DR表达动态 | 第103-106页 |
| 2. 结果 | 第106-119页 |
| ·猪瘟病毒C、N~(pro)和E2基因的克隆与鉴定 | 第106-107页 |
| ·重组质粒T-C、T-N~(pro)和T-E2的测序及同源性分析 | 第107-108页 |
| ·猪瘟病毒C、N~(pro)和E2基因真核表达质粒的构建 | 第108-110页 |
| ·猪瘟病毒感染对PK-15细胞中SLA-DR表达的影响 | 第110-112页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株C蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第112-113页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株N~(pro)蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第113-114页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株E2蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第114-115页 |
| ·猪瘟病毒C和N~(pro)蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第115-116页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株C和E2蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第116-117页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株N~(pro)和E2蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第117-118页 |
| ·猪瘟病毒Shimen毒株C、N~(pro)和E2蛋白对宿主细胞中SLA-DR表达的影响 | 第118-119页 |
| 3. 讨论 | 第119-121页 |
| 4. 小结 | 第121-122页 |
| 第四章 全文结论 | 第122-123页 |
| 第五章 展望 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-150页 |
| 附录一 | 第150-156页 |
| 附录二 | 第156-167页 |
| 致谢 | 第167-168页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第168页 |
