| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-71页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒编码蛋白功能研究进展 | 第15-51页 |
| 1 病毒基本特性 | 第15-19页 |
| ·病毒粒子结构 | 第16-17页 |
| ·致病机理 | 第17-19页 |
| 2 病毒非结构蛋白 | 第19-23页 |
| ·病毒非结构蛋白功能 | 第19-22页 |
| ·非结构蛋白免疫特性 | 第22-23页 |
| 3 PRRSV结构蛋白 | 第23-35页 |
| ·核衣壳N蛋白 | 第23-28页 |
| ·基质蛋白M | 第28-29页 |
| ·GP5糖基化囊膜蛋白 | 第29-32页 |
| ·次要结构蛋白 | 第32-35页 |
| 4 病毒结构蛋白的相互作用 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-51页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫与疫苗研究进展 | 第51-71页 |
| 1 先天性免疫反应 | 第51-54页 |
| ·PRRSV与托样受体之间的相互作用 | 第51-52页 |
| ·PRRSV调节Ⅰ型干扰素 | 第52-53页 |
| ·其他细胞因子的调节 | 第53页 |
| ·免疫相关细胞表面分子的调节 | 第53-54页 |
| 2 获得性免疫应答 | 第54-57页 |
| ·体液免疫应答 | 第54-55页 |
| ·细胞介导的免疫应答 | 第55-56页 |
| ·免疫应答在清除病毒和疫苗诱导的免疫保护中的作用 | 第56-57页 |
| ·PRRSV感染中的调节性T细胞 | 第57页 |
| 3 PRRSV疫苗 | 第57-64页 |
| ·开发PRRSV疫苗的障碍 | 第58页 |
| ·PRRSV亚单位疫苗 | 第58-59页 |
| ·反向遗传操作系统为基础的PRRSV疫苗 | 第59-61页 |
| ·用于开发新一代PRRSV疫苗的策略和方法 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 第二部分 实验研究 | 第71-161页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP1非结构蛋白原核表达与单克隆抗体研制 | 第71-97页 |
| 摘要 | 第71-72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-84页 |
| ·病毒、细胞及其它材料 | 第72-73页 |
| ·引物的设计与合成 | 第73页 |
| ·NSP1基因PCR扩增及纯化 | 第73-74页 |
| ·NSP1原核表达载体的构建与鉴定 | 第74-76页 |
| ·重组NSP1蛋白表达、纯化与鉴定 | 第76-79页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第79-84页 |
| 2 结果 | 第84-89页 |
| ·NSP1基因重组质粒的构建 | 第84-85页 |
| ·重组NSP1蛋白表达、纯化与抗原性鉴定 | 第85-86页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选 | 第86-87页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第87-89页 |
| 3 讨论 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP1非结构蛋白B细胞表位的鉴定 | 第97-117页 |
| 摘要 | 第97-98页 |
| 1 材料与方法 | 第98-106页 |
| ·毒株、质粒及其他材料 | 第98页 |
| ·NSP1蛋白基因分段克隆引物设计及合成 | 第98-100页 |
| ·基因扩增与重组表达载体构建 | 第100-102页 |
| ·目的蛋白表达与鉴定 | 第102-103页 |
| ·目的蛋白大量表达、纯化与复性 | 第103-104页 |
| ·NSP1 B细胞表位的鉴定 | 第104-105页 |
| ·ELISA方法鉴定NSP1 B细胞表位 | 第104-105页 |
| ·Western blot鉴定NSP1 B细胞表位 | 第105页 |
| ·Pepscan技术鉴定NSP1 B细胞表位 | 第105页 |
| ·NSP1 B细胞表位氨基酸序列比对 | 第105-106页 |
| ·统计学分析 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-113页 |
| ·NSP1截短基因片段的扩增 | 第106-107页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第107页 |
| ·重组蛋白的表达和抗原性鉴定 | 第107-108页 |
| ·间接ELISA方法鉴定NSP1 B细胞表位 | 第108-110页 |
| ·Western blot方法鉴定NSP1蛋白B细胞表位 | 第110-111页 |
| ·Pepscan方法鉴定NSP1 B细胞表位 | 第111页 |
| ·NSP1 B细胞表位氨基酸序列比对 | 第111-113页 |
| 3 讨论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 第五章 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3-7结构蛋白T细胞表位的解析 | 第117-143页 |
| 摘要 | 第117-118页 |
| 1 材料和方法 | 第118-126页 |
| ·材料 | 第118-122页 |
| ·动物攻毒及样品采集 | 第122-123页 |
| ·酶联免疫斑点技术检测IFN-γ(IFN-γ ELISPOT) | 第123-125页 |
| ·T细胞表位氨基酸序列的比对 | 第125页 |
| ·数据统计分析 | 第125-126页 |
| 2 结果 | 第126-135页 |
| ·病毒感染仔猪评价 | 第126-127页 |
| ·PRRSV抗原体外刺激PBMC的应答 | 第127-128页 |
| ·IFN-γ ELISPOT筛选PRRSV特异性多肽 | 第128-134页 |
| ·T细胞表位氨基酸序列比对 | 第134-135页 |
| 3 讨论 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-143页 |
| 第六章 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白B\T细胞表位基因疫苗抗原分子设计与免疫特性研究 | 第143-161页 |
| 摘要 | 第143-144页 |
| 1 材料与方法 | 第144-152页 |
| ·质粒、病毒、菌株与细胞 | 第144页 |
| ·试剂 | 第144页 |
| ·基于B\T细胞表位基因疫苗抗原分子设计 | 第144-146页 |
| ·抗原分子基因合成与重组质粒构建 | 第146-147页 |
| ·重组蛋白表达与鉴定 | 第147-148页 |
| ·重组质粒DNA制备与小鼠免疫试验 | 第148-152页 |
| ·数据统计分析 | 第152页 |
| 2 结果 | 第152-158页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第152-153页 |
| ·重组蛋白表达及鉴定 | 第153-154页 |
| ·小鼠免疫试验结果 | 第154-158页 |
| 3 讨论 | 第158-159页 |
| 参考文献 | 第159-161页 |
| ABSTRACT | 第161-163页 |
| 全文总结 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165-167页 |
| 发表论文 | 第167页 |
