| 符号说明及缩略词 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-17页 |
| Abstract | 第17-23页 |
| 1 前言 | 第23-45页 |
| ·马立克氏病病毒（MDV）的研究进展 | 第23-28页 |
| ·病原学 | 第23-24页 |
| ·流行病学 | 第24-26页 |
| ·病理生物学 | 第26-27页 |
| ·诊断技术 | 第27-28页 |
| ·MDV 分子生物学研究进展 | 第28-32页 |
| ·MDV 基因组结构 | 第28-29页 |
| ·MDV 结构蛋白及相关基因 | 第29-32页 |
| ·禽反转录病毒与 MDV 基因重组的研究进展 | 第32-34页 |
| ·MDV 与 REV 间的基因重组 | 第32-33页 |
| ·MDV 与 ALV 间的基因重组 | 第33-34页 |
| ·REV 与 MDV 基因重组的机制 | 第34页 |
| ·带有 REV-LTR 的重组 MDV 野毒株 GX0101 流行病学意义 | 第34页 |
| ·BAC 技术和同源重组技术在 MDV 研究中的应用 | 第34-39页 |
| ·细菌人工染色体载体系统(BAC) | 第34-36页 |
| ·利用 BAC 构建 MDV 感染性克隆 | 第36-37页 |
| ·基于 MDV BAC 感染性克隆的同源重组技术 | 第37-39页 |
| ·基因芯片技术在 MDV 研究中的应用 | 第39-40页 |
| ·基因芯片的简介 | 第39-40页 |
| ·基因芯片的应用 | 第40页 |
| ·MD 疫苗研究进展 | 第40-43页 |
| ·常规致弱疫苗 | 第40-41页 |
| ·新型基因工程疫苗 | 第41-43页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第43-45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-71页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·常规分子克隆试剂 | 第45页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第45页 |
| ·荧光定量相关试剂 | 第45页 |
| ·多克隆抗体制备相关试剂 | 第45页 |
| ·Agilent 表达谱芯片相关试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·相关疫苗及抗原 | 第46页 |
| ·相关病毒及菌种 | 第46页 |
| ·病毒增殖与鉴定相关试验材料 | 第46-47页 |
| ·常规试验操作方法 | 第47-51页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第47页 |
| ·MDV 的拯救、鉴定 | 第47页 |
| ·MDV 的增殖、定量 | 第47-48页 |
| ·MDVBAC 质粒的大量制备及电转化 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的纯化以及SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第49-50页 |
| ·淋巴细胞的分离以及DNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·病毒RNA 的提取以及反转录 | 第51页 |
| ·自然重组马立克氏病毒 GX0101 的全基因组序列的测定和比较分析 | 第51-52页 |
| ·GX0101 感染性克隆GX0101-BAC 质粒的制备 | 第51页 |
| ·GX0101 感染性克隆GX0101-BAC 的测序 | 第51-52页 |
| ·GX0101 的全基因组分析 | 第52页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失疫苗候选株及其安全性免疫保护效果的比较研究 | 第52-57页 |
| ·利用同源重组技术构建 SC9-1(GX0101Δmeq kana)株 MDV | 第52-53页 |
| ·利用同源重组技术构建SC9-2(GX0101 meq kana BAC)株MDV | 第53-54页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株MDV 的拯救、鉴定 | 第54-55页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株MDV 在细胞上的复制水平 | 第55页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株MDV 对SPF 鸡的安全性 | 第55页 |
| ·SC9-1 株MDV 在鸡体内的增殖水平 | 第55-56页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株MDV 对SPF 鸡的免疫保护效果 | 第56-57页 |
| ·SC9-1 株MDV 对海兰褐蛋鸡的免疫保护效果 | 第57页 |
| ·SC9-1 株MDV 对SPF 鸡感染低剂量rMd5 的免疫保护效果 | 第57页 |
| ·GX0101 在自然感染传播过程中竞争性选择压优势的模拟分析 | 第57-58页 |
| ·用于区分MDVGX0101 和GX0101 LTR 的荧光定量PCR 探针设计 | 第57-58页 |
| ·双重荧光定量PCR 探针标准曲线的制备 | 第58页 |
| ·接种相同剂量GX0101 和GX0101 LTR 后两种病毒在鸡的接触传播性比较 | 第58页 |
| ·接种不同剂量GX0101 和GX0101 LTR 后两种病毒在鸡的接触传播性比较 | 第58页 |
| ·缺失 GX0101 SORF2 基因的重组病毒的构建及其生物学活性比较 | 第58-61页 |
| ·鼠抗MDVSORF2 蛋白多克隆抗体制备 | 第58-59页 |
| ·敲除SORF2 基因的重组病毒GX0101Δsorf2 的构建 | 第59-60页 |
| ·间接免疫荧光试验鉴定重组病毒GX0101Δsorf238 | 第60页 |
| ·Western blot 对重组病毒GX0101Δsorf2 以及SORF2 蛋白特异性鉴定 | 第60页 |
| ·GX0101Δsorf2 在CEF 细胞上的复制能力的检测 | 第60页 |
| ·GX0101Δsorf2 的致病性试验 | 第60-61页 |
| ·GX0101Δsorf2 在鸡体内的的病毒血症的检测 | 第61页 |
| ·GX0101Δsorf2 对SPF 鸡体液免疫应答的影响 | 第61页 |
| ·GX0101Δsorf2 和GX0101 横向传播能力比较 | 第61页 |
| ·插入 ALV-LTR 的重组 MDV 的构建及其生物学活性的比较研究 | 第61-66页 |
| ·插入ALV-LTR 片段的重组MDV 的构建 | 第61-65页 |
| ·重组MDVGX0101-ALV-LTR 的拯救 | 第65页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 在细胞上的复制能力 | 第65页 |
| ·间接免疫荧光鉴定GX0101-ALV-LTR SORF2 蛋白的表达 | 第65页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 在CEF 细胞培养的稳定性鉴定 | 第65页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 的致病性检测及鸡体内的稳定性鉴定 | 第65-66页 |
| ·LTR 插入片段对重组病毒的病毒基因表达以及重组病毒对宿主基因表达的影响 | 第66-71页 |
| ·不同CEF 细胞感染不同重组病毒的总RNA 提取 | 第66页 |
| ·样品的RNA 的放大和荧光标记 | 第66-68页 |
| ·Agilent 表达谱芯片杂交 | 第68-69页 |
| ·Agilent 表达谱芯片扫描 | 第69页 |
| ·Agilent 表达谱芯片结果的质控检测 | 第69页 |
| ·重组病毒GX0101、GX0101-ALV-LTR 与GX0101 LTR 的病毒基因差异表达的分析 | 第69页 |
| ·重组病毒GX0101、GX0101-ALV-LTR 与GX0101 LTR 对宿主基因表达的差异性分析 | 第69页 |
| ·GX0101 重组REV-LTR 片段对其重组位点后的基因转录水平的影响 | 第69-71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-141页 |
| ·GX0101 的全基因组序列的测定和比较分析 | 第71-86页 |
| ·GX0101 的基因组结构以及与其它不同株 MDV 的系统进化关系 | 第71-72页 |
| ·从 GX0101 全基因组水平比较分析 REV-LTR 插入片段 | 第72-73页 |
| ·相对其它毒株 GX0101 基因组中缺失的片段 | 第73-75页 |
| ·相对其它毒株 GX0101 基因组中增加的片段 | 第75-77页 |
| ·GX0101 基因组的开放阅读框和单核苷酸多态性 | 第77-86页 |
| ·GX0101 与英国分离株 C12/130 感染性克隆的基因组差异比较 | 第86页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失疫苗候选株及其安全性免疫保护效果的比较 | 第86-94页 |
| ·SC9-1、SC9-2 疫苗候选株的构建和鉴定 | 第86-87页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株 MDV 拯救鉴定结果 | 第87-88页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株 MDV 在细胞上的复制能力 | 第88页 |
| ·SC9-1 株 MDV 在鸡体内的增殖水平 | 第88-89页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株 MDV 对 SPF 鸡的安全性 | 第89-92页 |
| ·SC9-1、SC9-2 株 MDV 对 SPF 鸡的免疫保护效果 | 第92-93页 |
| ·SC9-1 株 MDV 对海兰褐蛋鸡的免疫保护效果 | 第93-94页 |
| ·SC9-1 株 MDV 对 SPF 鸡感染低剂量 rMd5 的免疫保护效果 | 第94页 |
| ·SC9-1 疫苗候选株中试产品与 CVI988/Rispens 疫苗的保护性免疫力 | 第94页 |
| ·GX0101 在自然感染传播过程中竞争性选择压优势的模拟分析 | 第94-100页 |
| ·区分 MDV GX0101 和 GX0101 LTR 的荧光定量 PCR 探针具有良好的特异性 | 第94-98页 |
| ·双重荧光定量 PCR 探针标准曲线的制备 | 第98页 |
| ·接种相同剂量 GX0101 和 GX0101 LTR 后两种病毒在鸡的接触传播性比较 | 第98-100页 |
| ·接种不同剂量 GX0101 和 GX0101 LTR 后两种病毒在鸡的接触传播性比较 | 第100页 |
| ·缺失 GX0101 SORF2 基因的重组病毒的构建及其生物学活性的研究 | 第100-107页 |
| ·SORF2 融合目的蛋白的表达纯化及分析鉴定 | 第100-102页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)鉴定高效价多克隆抗体特异性 | 第102页 |
| ·GX0101Δsorf2 的 PCR 鉴定结果 | 第102-103页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 GX0101Δsorf2 的结果 | 第103-104页 |
| ·Western blot 对重组病毒 GX0101 sorf2 以及 SORF2 蛋白的特异性鉴定 | 第104页 |
| ·GX0101Δsorf2 在 CEF 细胞上的复制能力 | 第104页 |
| ·GX0101Δsorf2 与亲本病毒 bac-GX0101 在鸡体内的病毒血症比较 | 第104-105页 |
| ·GX0101Δsorf2 对 SPF 鸡的致病性 | 第105页 |
| ·GX0101Δsorf2 对鸡体体液免疫应答的影响 | 第105-106页 |
| ·GX0101Δsorf2 对鸡体重的影响 | 第106页 |
| ·GX0101Δsorf2 和 GX0101 横向传播能力的比较 | 第106-107页 |
| ·插入 ALV-LTR 的重组 MDV 的构建及其生物学活性的比较 | 第107-113页 |
| ·不同重组 BAC 克隆质粒的 PCR 鉴定 | 第107-108页 |
| ·拯救的重组病毒 GX0101-ALV-LTR 在细胞培养上形成的病毒蚀斑 | 第108-110页 |
| ·插入 ALV-LTR 片段对重组 MDV SORF2 基因的转录和表达影响 | 第110页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 在细胞上复制性能 | 第110-111页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 基因组中 ALV-LTR 片段稳定性的鉴定 | 第111-112页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 对 SPF 鸡体重的影响 | 第112页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 对 SPF 鸡抗体水平的影响 | 第112页 |
| ·GX0101-ALV-LTR 对 SPF 鸡的致死率和致肿瘤率 | 第112-113页 |
| ·LTR 插入片段对重组病毒的病毒基因表达以及重组病毒对宿主基因表达的影响 | 第113-141页 |
| ·样品总 RNA 的提取和质检结果 | 第113-114页 |
| ·Agilent 表达谱芯片结果的质控检测结果 | 第114-115页 |
| ·Agilent 表达谱芯片扫描数据归一化结果 | 第115页 |
| ·重组病毒GX0101、GX0101-ALV-LTR 与GX0101 LTR 的病毒基因差异表达的分析结果 | 第115-122页 |
| ·感染 GX0101、GX0101-ALV-LTR、GX0101 LTR 鸡的显著差异表达基因的分析结果 | 第122-139页 |
| ·Northern blot 技术对重组病毒 SORF2、US1、US10 基因的鉴定结果 | 第139页 |
| ·荧光定量 PCR 检测重组病毒 SORF2、US1、US10 基因表达结果 | 第139-141页 |
| 4 讨论 | 第141-151页 |
| 5 结论 | 第151-152页 |
| 6 参考文献 | 第152-164页 |
| 7 附录 | 第164-165页 |
| 8 致谢 | 第165-166页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第166-167页 |
