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喹赛多猪肝细胞受体筛选及上调EGF表达作用机理的研究

摘要第1-11页
Abstract第11-14页
縮略语表第14-16页
1 前言第16-20页
   ·研究背景第16-18页
   ·研究思路第18-19页
   ·研究目的和意义第19-20页
2 材料和方法第20-42页
   ·细胞株第20页
   ·实验动物第20页
   ·药品和试剂第20-22页
   ·主要仪器和设备第22-23页
   ·溶液配制第23-26页
   ·细胞的复苏、传代与冻存第26页
   ·猪原代肝细胞的分离与培养第26-27页
   ·亚细胞器的分离第27-30页
     ·猪肝组织亚细胞器的分离第27-28页
     ·肝细胞亚细胞器的分离第28-30页
   ·蛋白浓度的测定第30-31页
   ·亚细胞组分活性的鉴定第31-32页
   ·在体实验第32-33页
   ·离体实验第33-36页
     ·~3H-CYA在猪原代肝细胞中的分布第33页
     ·饱和实验第33-34页
     ·竞争抑制实验第34页
     ·细胞内第二信使测定第34-36页
   ·喹赛多代谢物的检测第36-37页
   ·自由基(ROS)测定第37-38页
     ·细胞内ROS测定第37-38页
     ·细胞上清O_2~-测定第38页
   ·实时荧光定量PCR检测相关基因的mRNA的表达第38-41页
     ·总RNA的提取第38-39页
     ·总RNA纯度及完整性的检测第39页
     ·逆转录反应第39页
     ·实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平第39-41页
   ·统计学分析第41-42页
3 结果第42-60页
   ·HL-7702细胞的培养第42页
   ·猪原代肝细胞的培养第42-43页
   ·BCA法测得的亚细胞器蛋白浓度第43-44页
   ·标志性酶在亚细胞器中的分布第44-45页
   ·~3H-CYA在猪肝脏中的分布第45-46页
   ·猪原代肝细胞各个亚细胞器~3H-CYA的分布第46-49页
   ·~3H-CYA与结合蛋白的结合特性第49-51页
     ·~3H-CYA与原代肝细胞和亚细胞器的饱和实验第49-50页
     ·~3H-CYA与喹赛多主要代谢物的竞争抑制试验第50-51页
   ·CYA作用L02和猪原代肝细胞之后第二信使变化第51-53页
     ·CYA作用L02和猪原代肝细胞之后cAMP变化第51-52页
     ·CYA作用L02和猪原代肝细胞后Ca~(2+)变化第52-53页
     ·CYA作用L02和猪原代肝细胞后IP3和DAG变化第53页
   ·喹赛多在原代肝细胞内代谢物的鉴定第53-56页
   ·喹赛多对猪原代肝细胞内自由基释放的时效量效关系第56-57页
   ·抗氧化剂作用下喹赛多对EGF基因mRNA水平的影响第57-60页
     ·RNA浓度的测定第57-58页
     ·RNA质量的鉴定第58页
     ·抗氧化剂作用下EGF基因mRNA的表达变化第58-60页
4 讨论第60-65页
   ·原代肝细胞分离条件选择第60页
   ·猪肝组织喹赛多结合蛋白的定位及结合特性研究第60-62页
     ·喹赛多在猪肝脏结合蛋白的定位第60-61页
     ·喹赛多与结合蛋白结合特性第61-62页
   ·喹赛多上调EGF基因表达的可能作用机理第62-64页
   ·喹赛多在猪肝脏结合蛋白的推测第64-65页
5 全文总结第65-66页
文献综述第66-81页
参考文献第81-92页
致谢第92-93页
附录第93-96页

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