| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·树干毕赤酵母 | 第7-9页 |
| ·S. stipitis 遗传特性 | 第7-8页 |
| ·S. stipitis 代谢机制和遗传转化研究进展 | 第8-9页 |
| ·分子生物学技术 | 第9-11页 |
| ·基因定点突变技术 | 第9-10页 |
| ·基因敲除技术 | 第10-11页 |
| ·酵母菌筛选标记 | 第11-13页 |
| ·尿嘧啶营养缺陷型 | 第12页 |
| ·博莱霉素 | 第12页 |
| ·潮霉素 B | 第12-13页 |
| ·G418 | 第13页 |
| ·立题背景与意义 | 第13页 |
| ·本课题研究目的与内容 | 第13-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-22页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株、质粒及培养条件 | 第15页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·引物 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-22页 |
| ·酵母细胞染色体 DNA 的提取及浓度测定 | 第17页 |
| ·DNA 含量标准曲线的测定 | 第17-18页 |
| ·酵母染色体的提取 | 第18页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第18-19页 |
| ·PCR 扩增反应条件 | 第19页 |
| ·质粒的提取、酶切及去磷酸化、DNA 片段纯化 | 第19页 |
| ·基因定点突变 | 第19-20页 |
| ·酵母菌醋酸锂转化 | 第20页 |
| ·S. stipitis 对抗真菌药物的敏感试验 | 第20页 |
| ·同源重组载体的构建 | 第20-21页 |
| ·标记基因的切除 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-37页 |
| ·S. stipitis 染色体倍性验证 | 第22-23页 |
| ·尿嘧啶营养缺陷型的构建 | 第23-25页 |
| ·URA3 基因同源重组载体的构建 | 第23页 |
| ·尿嘧啶营养缺陷型的构建与鉴定 | 第23-25页 |
| ·S. stipitis 转化子抗药性筛选标记的选择 | 第25-27页 |
| ·抗生素的选择 | 第25-26页 |
| ·固培养基中 S. stipitis 对抗生素的敏感性 | 第26页 |
| ·液体培养基中 S. stipitis 对 Hygromycin B 的敏感性 | 第26-27页 |
| ·基因定点突变修饰及表达 | 第27-33页 |
| ·cre 基因定点突变 | 第28-29页 |
| ·hpt、ble 基因定点突变 | 第29-30页 |
| ·pSH47-Hpt 的构建 | 第30-32页 |
| ·hpt 基因突变前后抗性比较 | 第32-33页 |
| ·Cre/Loxp 系统的应用 | 第33-37页 |
| ·ALD5 同源重组载体的构建及验证 | 第34-35页 |
| ·ALD5 基因缺失菌株的构建及验证 | 第35-36页 |
| ·Cre 重组酶的表达 | 第36-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第42页 |
