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水稻高亲和磷转运蛋白基因OsPht1;8的功能研究

目录第1-8页
摘要第8-10页
ABSTRACT第10-13页
縮略词第13-15页
第一章 文献综述第15-33页
 1 引言第15-16页
 2 缺磷胁迫时植株在形态学和生理生化方面的适应机制第16-21页
   ·改变根系第16-17页
   ·利用与真菌的共生来提高磷利用能力第17-18页
   ·缺磷时植物根部分泌物的大量合成第18-20页
   ·缺磷处理诱导生物膜结构及代谢途径的改变第20-21页
 3 植物对磷素营养的吸收运输系统-磷转运蛋白第21-24页
   ·Pht1磷转运蛋白第21-23页
   ·Pht2、Pht3和Pht4磷转运蛋白第23-24页
 4 植物体内磷调控机制的研究进展第24-30页
   ·植物对磷信号的感应第24-25页
   ·植物中缺磷信号的传导及分子调控第25-29页
   ·缺磷反应的顺式调控元件第29-30页
 5 研究目的和意义第30-33页
第二章 OsPT8基因生物信息学和表达模式分析第33-47页
 1 OsPT8基因生物信息学分析第33-36页
   ·材料与方法第33-36页
     ·水稻高亲和磷酸盐转运蛋白家族基因氨基酸序列分析第33-34页
     ·OsPT8基因启动子基序分析第34页
     ·水稻与其它植物Pht1家族基因的系统进化树分析第34页
     ·跨膜拓扑模型分析第34页
     ·野生型日本晴水稻的正常供磷和低磷处理第34-35页
     ·实时荧光定量PCR第35-36页
 2 OsPT8基因亚细胞定位分析第36-38页
   ·试验材料第36-37页
   ·试验方法第37-38页
     ·GFP融合表达载体的构建第37页
     ·基因枪法转化洋葱表皮细胞第37-38页
 3 结果和分析第38-44页
   ·OsPT8与家族其余基因氨基酸序列及进化树分析第38-41页
   ·OsPT8基因启动子分析第41页
   ·OsPT8跨膜拓扑模型分析第41-42页
   ·OsPT8基因的表达模式分析第42-43页
   ·OsPT8亚细胞定位分析第43-44页
 4 讨论第44-47页
第三章 OsPT8在异源表达系统中的功能鉴定第47-59页
 1 OsPT8基因在酵母表达系统中的功能互补第47-53页
   ·试验材料第47-48页
   ·试验方法第48-51页
     ·酵母表达载体构建过程第48-49页
     ·酵母感受态细胞制备及其质粒转化第49页
     ·磷转运蛋白基因OsPT8在酵母中的功能验证第49-51页
   ·结果与分析第51-53页
     ·酵母互补试验颜色反应第51页
     ·磷转运蛋白基因OsPT8与质子的共转运第51-53页
     ·磷吸收动力学的测定第53页
 2 蛙卵异源表达系统分析OsPT8功能特征第53-57页
   ·试验材料第53-54页
   ·试验方法第54-56页
     ·表达载体的构建第54页
     ·cRNA的体外合成第54-55页
     ·蛙卵的获得第55页
     ·cRNA的微注射第55-56页
     ·~(33)P同位素吸收试验测定蛙卵的磷吸收量第56页
   ·结果与分析第56-57页
 3 讨论第57-59页
第四章 OsPT8转基因材料的获得和表型分析第59-77页
 1 转基因材料的获得和鉴定第59-65页
   ·试验材料第59-60页
   ·试验方法第60-65页
     ·OsPT8基因超表达载体的构建第60-61页
     ·OsPT8基因RNAi干涉载体的构建第61-62页
     ·水稻转基因第62-64页
     ·转基因苗的检测第64-65页
     ·种子繁殖第65页
     ·T_1代转基因苗进行正常供磷和低磷水培处理第65页
     ·植物总RNA的提取第65页
     ·逆转录及半定量RT-PCR第65页
     ·Real time-PCR检测第65页
 2 超表达和干涉转基因株系的表型分析第65-67页
   ·试验材料第65页
   ·试验方法第65-67页
     ·转基因材料的正常供磷和低磷处理第65-66页
     ·植株有效磷含量的测定第66页
     ·植株全磷含量的测定第66页
     ·OsPT8超表达及沉默株系~(33)P吸收速率的测定第66页
     ·OsPT8超表达株系的根系形态特征第66-67页
 3 结果与分析第67-75页
   ·OsPT8转基因苗的初步鉴定和表型分离第67-69页
   ·OsPT8转基因株系在正常供磷水培条件下的表型分析第69-71页
   ·OsPT8转基因株系在低磷条件下的表型分析第71-72页
   ·OsPT8基因对水稻磷酸盐吸收和转运的影响第72-75页
 4 讨论第75-77页
第五章 OsPT8在磷素从营养器官向生殖器官转运过程中的作用第77-89页
 1 试验材料第77页
   ·水稻材料第77页
 2 试验方法第77-79页
   ·鉴定突变体第77-78页
   ·OsPT8超表达株系的盆栽试验表型观察第78页
     ·不同磷浓度梯度土壤样品的制备第78页
     ·酸性土壤有效磷的测定第78页
     ·植物全磷的测定第78页
     ·株高、分蘖数、有效穗、穗长及结实率的统计第78页
   ·正常供磷条件下OsPT8沉默材料的大田试验及生育后期表型观察第78-79页
     ·土壤有效磷含量的测定第78-79页
     ·植株全磷的测定第79页
 3 结果和分析第79-87页
   ·OsPT8 T-DNA插入突变体的鉴定第79-80页
   ·OsPT8基因超表达株系土培试验生理结果分析第80-82页
   ·OsPT8基因超表达增强磷酸盐从水稻营养器官向生殖器官的转运第82-85页
   ·OsPT8基因沉默表达降低磷酸盐从水稻营养器官向生殖器官的转运第85-87页
 4 讨论第87-89页
第六章 OsPT8与水稻磷素吸收和转运相关基因之间的关系第89-97页
 1 试验材料第89页
 2 试验方法第89-92页
   ·转基因材料的正常供磷和低磷处理第89页
   ·植物总RNA的提取第89-90页
   ·逆转录及定量Q-PCR分析第90-92页
 3 结果与分析第92-94页
   ·OsPT8超表达和沉默株系中Pht1家族基因的表达分析第92-93页
   ·OsPHR2超表达和沉默材料中OsPT8基因的表达分析第93-94页
 4 讨论第94-97页
全文结论第97-99页
参考文献第99-115页
创新点第115-117页
附录第117-145页
在读期间发表的论文第145-147页
致谢第147页

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