| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 縮略词 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 引言 | 第15-16页 |
| 2 缺磷胁迫时植株在形态学和生理生化方面的适应机制 | 第16-21页 |
| ·改变根系 | 第16-17页 |
| ·利用与真菌的共生来提高磷利用能力 | 第17-18页 |
| ·缺磷时植物根部分泌物的大量合成 | 第18-20页 |
| ·缺磷处理诱导生物膜结构及代谢途径的改变 | 第20-21页 |
| 3 植物对磷素营养的吸收运输系统-磷转运蛋白 | 第21-24页 |
| ·Pht1磷转运蛋白 | 第21-23页 |
| ·Pht2、Pht3和Pht4磷转运蛋白 | 第23-24页 |
| 4 植物体内磷调控机制的研究进展 | 第24-30页 |
| ·植物对磷信号的感应 | 第24-25页 |
| ·植物中缺磷信号的传导及分子调控 | 第25-29页 |
| ·缺磷反应的顺式调控元件 | 第29-30页 |
| 5 研究目的和意义 | 第30-33页 |
| 第二章 OsPT8基因生物信息学和表达模式分析 | 第33-47页 |
| 1 OsPT8基因生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·水稻高亲和磷酸盐转运蛋白家族基因氨基酸序列分析 | 第33-34页 |
| ·OsPT8基因启动子基序分析 | 第34页 |
| ·水稻与其它植物Pht1家族基因的系统进化树分析 | 第34页 |
| ·跨膜拓扑模型分析 | 第34页 |
| ·野生型日本晴水稻的正常供磷和低磷处理 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2 OsPT8基因亚细胞定位分析 | 第36-38页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-38页 |
| ·GFP融合表达载体的构建 | 第37页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第37-38页 |
| 3 结果和分析 | 第38-44页 |
| ·OsPT8与家族其余基因氨基酸序列及进化树分析 | 第38-41页 |
| ·OsPT8基因启动子分析 | 第41页 |
| ·OsPT8跨膜拓扑模型分析 | 第41-42页 |
| ·OsPT8基因的表达模式分析 | 第42-43页 |
| ·OsPT8亚细胞定位分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 OsPT8在异源表达系统中的功能鉴定 | 第47-59页 |
| 1 OsPT8基因在酵母表达系统中的功能互补 | 第47-53页 |
| ·试验材料 | 第47-48页 |
| ·试验方法 | 第48-51页 |
| ·酵母表达载体构建过程 | 第48-49页 |
| ·酵母感受态细胞制备及其质粒转化 | 第49页 |
| ·磷转运蛋白基因OsPT8在酵母中的功能验证 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-53页 |
| ·酵母互补试验颜色反应 | 第51页 |
| ·磷转运蛋白基因OsPT8与质子的共转运 | 第51-53页 |
| ·磷吸收动力学的测定 | 第53页 |
| 2 蛙卵异源表达系统分析OsPT8功能特征 | 第53-57页 |
| ·试验材料 | 第53-54页 |
| ·试验方法 | 第54-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第54页 |
| ·cRNA的体外合成 | 第54-55页 |
| ·蛙卵的获得 | 第55页 |
| ·cRNA的微注射 | 第55-56页 |
| ·~(33)P同位素吸收试验测定蛙卵的磷吸收量 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 OsPT8转基因材料的获得和表型分析 | 第59-77页 |
| 1 转基因材料的获得和鉴定 | 第59-65页 |
| ·试验材料 | 第59-60页 |
| ·试验方法 | 第60-65页 |
| ·OsPT8基因超表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·OsPT8基因RNAi干涉载体的构建 | 第61-62页 |
| ·水稻转基因 | 第62-64页 |
| ·转基因苗的检测 | 第64-65页 |
| ·种子繁殖 | 第65页 |
| ·T_1代转基因苗进行正常供磷和低磷水培处理 | 第65页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第65页 |
| ·逆转录及半定量RT-PCR | 第65页 |
| ·Real time-PCR检测 | 第65页 |
| 2 超表达和干涉转基因株系的表型分析 | 第65-67页 |
| ·试验材料 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-67页 |
| ·转基因材料的正常供磷和低磷处理 | 第65-66页 |
| ·植株有效磷含量的测定 | 第66页 |
| ·植株全磷含量的测定 | 第66页 |
| ·OsPT8超表达及沉默株系~(33)P吸收速率的测定 | 第66页 |
| ·OsPT8超表达株系的根系形态特征 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-75页 |
| ·OsPT8转基因苗的初步鉴定和表型分离 | 第67-69页 |
| ·OsPT8转基因株系在正常供磷水培条件下的表型分析 | 第69-71页 |
| ·OsPT8转基因株系在低磷条件下的表型分析 | 第71-72页 |
| ·OsPT8基因对水稻磷酸盐吸收和转运的影响 | 第72-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 OsPT8在磷素从营养器官向生殖器官转运过程中的作用 | 第77-89页 |
| 1 试验材料 | 第77页 |
| ·水稻材料 | 第77页 |
| 2 试验方法 | 第77-79页 |
| ·鉴定突变体 | 第77-78页 |
| ·OsPT8超表达株系的盆栽试验表型观察 | 第78页 |
| ·不同磷浓度梯度土壤样品的制备 | 第78页 |
| ·酸性土壤有效磷的测定 | 第78页 |
| ·植物全磷的测定 | 第78页 |
| ·株高、分蘖数、有效穗、穗长及结实率的统计 | 第78页 |
| ·正常供磷条件下OsPT8沉默材料的大田试验及生育后期表型观察 | 第78-79页 |
| ·土壤有效磷含量的测定 | 第78-79页 |
| ·植株全磷的测定 | 第79页 |
| 3 结果和分析 | 第79-87页 |
| ·OsPT8 T-DNA插入突变体的鉴定 | 第79-80页 |
| ·OsPT8基因超表达株系土培试验生理结果分析 | 第80-82页 |
| ·OsPT8基因超表达增强磷酸盐从水稻营养器官向生殖器官的转运 | 第82-85页 |
| ·OsPT8基因沉默表达降低磷酸盐从水稻营养器官向生殖器官的转运 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-89页 |
| 第六章 OsPT8与水稻磷素吸收和转运相关基因之间的关系 | 第89-97页 |
| 1 试验材料 | 第89页 |
| 2 试验方法 | 第89-92页 |
| ·转基因材料的正常供磷和低磷处理 | 第89页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第89-90页 |
| ·逆转录及定量Q-PCR分析 | 第90-92页 |
| 3 结果与分析 | 第92-94页 |
| ·OsPT8超表达和沉默株系中Pht1家族基因的表达分析 | 第92-93页 |
| ·OsPHR2超表达和沉默材料中OsPT8基因的表达分析 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| 全文结论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-115页 |
| 创新点 | 第115-117页 |
| 附录 | 第117-145页 |
| 在读期间发表的论文 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
