| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 重组酵母菌株一览表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-36页 |
| ·真菌疏水蛋白的研究进展 | 第16-23页 |
| ·疏水蛋白分类与结构 | 第16-20页 |
| ·疏水蛋白的自组装与两亲性 | 第20-21页 |
| ·疏水蛋白的应用 | 第21-22页 |
| ·疏水蛋白的表达 | 第22-23页 |
| ·微生物脂肪酶的研究进展 | 第23-30页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第23页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第23-25页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第25-26页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B | 第26-30页 |
| ·酵母表面展示技术研究进展 | 第30-34页 |
| ·酵母细胞表面表达技术简介 | 第30-33页 |
| ·酵母细胞表面展示技术的发展 | 第33-34页 |
| ·本论文研究背景与研究意义 | 第34页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 疏水蛋白在毕赤酵母细胞表面展示及对细胞表面疏水性的影响 | 第36-60页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·材料与设备 | 第37-41页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第37-38页 |
| ·主要仪器与设备 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·培养基与溶液 | 第40-41页 |
| ·实验策略 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-51页 |
| ·酵母基因组提取 | 第42页 |
| ·大肠杆菌培养及感受态细胞制备 | 第42页 |
| ·疏水蛋白基因 HFBI 和 SC3 的合成 | 第42-43页 |
| ·酵母表面展示载体 pZfH21、pZfS21 构建 | 第43-45页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌重组子筛选鉴定 | 第46页 |
| ·表面展示疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株构建 | 第46-48页 |
| ·重组毕赤酵母表面展示疏水蛋白的分析 | 第48-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-59页 |
| ·疏水蛋白展示表达质粒构建与鉴定 | 第51-54页 |
| ·表面展示疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株 PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·疏水蛋白展示表达对酵母菌株表面性质的影响 | 第54-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 共展示疏水蛋白对毕赤酵母细胞表面展示 CALB 的影响 | 第60-82页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料与设备 | 第61-63页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第61页 |
| ·主要仪器与设备 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·培养基与试剂 | 第62-63页 |
| ·实验策略 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·酵母表面展示脂肪酶 CALB 载体的构建 | 第64页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第64-65页 |
| ·大肠杆菌重组子筛选鉴定 | 第65页 |
| ·表面展示脂肪酶 CALB 的毕赤酵母重组菌株 | 第65-67页 |
| ·表面共展示 CALB/疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株 | 第67页 |
| ·共展示酵母细胞表面的 CALB 数量和疏水蛋白分析 | 第67-69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-81页 |
| ·CALB 表面展示表达质粒构建与鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组酵母菌株构建与筛选 | 第70-72页 |
| ·KhCSa 菌株发酵及细胞表面酶活检测 | 第72-73页 |
| ·共展示 CALB/疏水蛋白的重组酵母菌株构建 | 第73-74页 |
| ·CALB/疏水蛋白共展示酵母细胞表面的 CALB 和疏水蛋白分析 | 第74-81页 |
| ·本章小结 | 第81-82页 |
| 第四章 基于口蹄疫病毒 2A 肽的毕赤酵母共展示体系构建 | 第82-102页 |
| ·引言 | 第82-83页 |
| ·材料与设备 | 第83-85页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第83-84页 |
| ·主要仪器与设备 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84页 |
| ·培养基与试剂 | 第84-85页 |
| ·实验策略 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-90页 |
| ·重组质粒构建 | 第86-87页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第87页 |
| ·大肠杆菌重组子筛选鉴定 | 第87页 |
| ·毕赤酵母重组菌株构建 | 第87-89页 |
| ·重组酵母细胞表面的 CALB 和疏水蛋白分析 | 第89-90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-101页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第90-92页 |
| ·毕赤酵母重组菌株构建 | 第92-95页 |
| ·重组酵母细胞表面展示蛋白分析 | 第95-101页 |
| ·本章小结 | 第101-102页 |
| 第五章 疏水蛋白介导的 CALB 定向固定化初步研究 | 第102-121页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·材料与设备 | 第103-104页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第103页 |
| ·主要仪器与设备 | 第103页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第103-104页 |
| ·实验策略 | 第104-105页 |
| ·实验方法 | 第105-109页 |
| ·构建 CALB 与疏水蛋白融合表达的重组质粒 | 第105-106页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第106页 |
| ·大肠杆菌重组子筛选鉴定 | 第106页 |
| ·重组毕赤酵母菌株构建 | 第106页 |
| ·重组酵母发酵与酶活力检测 | 第106-107页 |
| ·融合蛋白对亲-疏水介质的吸附 | 第107-109页 |
| ·结果与讨论 | 第109-120页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第109-111页 |
| ·重组酵母菌株构建与筛选 | 第111-112页 |
| ·重组酵母发酵及疏水性检测 | 第112-116页 |
| ·融合蛋白对亲-疏水介质的吸附 | 第116-120页 |
| ·本章小结 | 第120-121页 |
| 结论与展望 | 第121-124页 |
| 结论 | 第121-122页 |
| 本论文创新点 | 第122-123页 |
| 展望 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-135页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 附件 | 第137页 |
