| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-17页 |
| 引言 | 第17-28页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯 | 第17-19页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯简介 | 第17-18页 |
| ·PHA 颗粒的组装 | 第18-19页 |
| ·PHA 研究发展阶段 | 第19-20页 |
| ·PHA 的性质及应用 | 第20-21页 |
| ·PHA 研究存在问题 | 第21页 |
| ·解决策略 | 第21-25页 |
| ·发酵技术 | 第21-23页 |
| ·基因工程技术 | 第23-25页 |
| ·利用甘油生产 PHA 研究 | 第25-26页 |
| ·烯醇酶 | 第26-27页 |
| ·研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第一章 三种假单胞菌耐受甘油和 PHA 合成能力评估 | 第28-36页 |
| ·实验目的 | 第28页 |
| ·方案设计与分析 | 第28页 |
| ·实验材料与仪器 | 第28-30页 |
| ·实验菌种 | 第28-29页 |
| ·常用生化试剂 | 第29-30页 |
| ·实验仪器和设备 | 第30页 |
| ·常用培养基配制 | 第30-32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·种子液的培养 | 第32页 |
| ·菌体的培养 | 第32页 |
| ·菌体干重称量 | 第32页 |
| ·气相色谱（GC）测定 PHA 组成及含量 | 第32-33页 |
| ·PHA 含量的计算 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 第二章 烯醇酶基因克隆及酶活力测定 | 第36-54页 |
| ·实验目的 | 第36页 |
| ·方案设计与分析 | 第36页 |
| ·实验材料与试剂 | 第36-43页 |
| ·菌株质粒和引物 | 第36页 |
| ·所用工具酶 | 第36页 |
| ·常用生化试剂 | 第36-37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第37-40页 |
| ·常用溶液和试剂 | 第40-42页 |
| ·DNA、蛋白质分子量标准 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·菌种保存与活化 | 第43页 |
| ·分子克隆法提取基因组 | 第43页 |
| ·质粒小量提取 | 第43-44页 |
| ·目的片段的 PCR 扩增 | 第44页 |
| ·试剂盒回收 PCR 产物 | 第44-45页 |
| ·酶切反应 | 第45页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第46页 |
| ·转化感受态细胞 | 第46页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第46-47页 |
| ·Ni-NTA 亲和层析柱的预处理 | 第47页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·Ni-NTA 琼脂糖的再生 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-52页 |
| ·烯醇酶基因的 PCR 扩增 | 第48-49页 |
| ·表达载体 pET28a-eno 的构建 | 第49页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第49-50页 |
| ·可溶表达条件优化 | 第50-51页 |
| ·可溶蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·蛋白酶活性测定 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第三章 产新型 PHA 嵌合酶构建 | 第54-80页 |
| ·实验目的 | 第54页 |
| ·实验方案设计与分析 | 第54页 |
| ·实验材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·实验菌种 | 第54页 |
| ·常用生化试剂 | 第54-55页 |
| ·实验仪器和设备 | 第55页 |
| ·常用培养基配制 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌 S17-1 介导的接合转化法 | 第55-56页 |
| ·其他方法 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-78页 |
| ·A. hydrophila WQ PHA 合酶基因（PhaCAh）克隆及活性分析 | 第56-63页 |
| ·R. eutropha H16 PHA 合酶基因（PhaCRe）克隆及活性分析 | 第63-68页 |
| ·寻找结合位点 | 第68-72页 |
| ·嵌合酶构建 | 第72-78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 第四章 结论 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 附录 | 第88-94页 |
| 攻读学位期间发表论文以及参加科研情况 | 第94-95页 |
