| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 资源家系测定性状的英文缩写 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 肌钙蛋白Ⅰ基因家族的研究进展 | 第13-22页 |
| ·肌钙蛋白的发现 | 第13-14页 |
| ·肌钙蛋白的亚单位亚型及表达情况 | 第14页 |
| ·TnI基因家族蛋白的氨基酸序列特征 | 第14-16页 |
| ·TnI基因家族的基因定位、结构与特性 | 第16-22页 |
| ·TNNI1基因的结构和特性 | 第16-17页 |
| ·TNNI2基因的结构和特性 | 第17-18页 |
| ·TNNI3基因的结构和特性 | 第18-22页 |
| 第二章 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第三章 材料和方法 | 第23-42页 |
| 1 试验材料 | 第23-25页 |
| ·试验样品 | 第23-24页 |
| ·用于基因分离和多态性检测的不同猪种DNA样品 | 第23页 |
| ·用于标记性状相关分析的DNA样品 | 第23页 |
| ·性状测定 | 第23页 |
| ·组织样品 | 第23-24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24页 |
| ·主要药品和试剂 | 第24-25页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-42页 |
| ·猪组织总RNA的提取、检测及cDNA第一链的合成 | 第25-27页 |
| ·猪组织总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·总RNA浓度的测定和质量检测 | 第26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| ·猪TnI基因家族全长cDNA序列的获得 | 第27-33页 |
| ·5′-Full RACE cDNA的合成 | 第27-30页 |
| ·去磷酸化处理 | 第27页 |
| ·去帽子反应 | 第27-28页 |
| ·5′RACE Adaptor的连接 | 第28页 |
| ·反转录反应 | 第28-29页 |
| ·Outer PCR反应 | 第29页 |
| ·Inner PCR反应 | 第29-30页 |
| ·利用电子克隆策略设计引物 | 第30-31页 |
| ·利用RT-PCR方法扩增cDNA片段 | 第30页 |
| ·RT-PCR反应 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR反应产物的检测 | 第31页 |
| ·RACE-PCR | 第31页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第31-32页 |
| ·克隆与测序 | 第32-33页 |
| ·载体连接 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法制备感受态) | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆子鉴定及测序 | 第33页 |
| ·猪基因组DNA的提取及检测 | 第33-34页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·猪基因组DNA的浓度测定和质量检测 | 第33-34页 |
| ·猪基因组序列DNA的克隆、测序及SNP研究 | 第34-36页 |
| ·猪基因组序列DNA的克隆 | 第34-35页 |
| ·猪TNNI2基因的SNP位点的PCR-RFLP检测 | 第35页 |
| ·PCR反应 | 第35页 |
| ·PCR产物的酶切及检测 | 第35页 |
| ·统计分析 | 第35-36页 |
| ·分子标记在不同猪种中的等位基因频率及基因型频率计算 | 第35页 |
| ·分子标记的基因效应分析 | 第35-36页 |
| ·猪TnI基因家族启动子区序列的获得 | 第36-39页 |
| ·基因组步移库的构建 | 第36-38页 |
| ·基因组DNA的质量检测 | 第37页 |
| ·基因组DNA的消化 | 第37页 |
| ·基因组DNA消化后的纯化 | 第37-38页 |
| ·连接接头 | 第38页 |
| ·基因组PCR步移 | 第38-39页 |
| ·猪TnI基因家族的表达分析 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR引物设计 | 第39-40页 |
| ·目的基因在不同肌纤维类型肌肉中的表达 | 第40页 |
| ·目的基因的组织表达谱 | 第40页 |
| ·基因表达分析 | 第40页 |
| ·生物信息学分析 | 第40-42页 |
| 第四章 结果与分析 | 第42-84页 |
| 1 猪基因组DNA和组织总RNA的提取 | 第42页 |
| 2 猪TnI基因cDNA全长序列的获得及氨基酸预测 | 第42-53页 |
| ·猪TNNI1基因cDNA序列及预测的氨基酸序列 | 第42-45页 |
| ·猪TNNI2基因cDNA序列及预测的氨基酸序列 | 第45-47页 |
| ·猪TNNI3基因cDNA序列及预测的氨基酸序列 | 第47-50页 |
| ·猪TnI基因家族的氨基酸序列分析 | 第50页 |
| ·猪TnI基因家族系统进化树分析 | 第50-53页 |
| 3 猪TnI基因家族的基因组结构和多态性分析 | 第53-66页 |
| ·TNNI1基因组序列获得和序列分析 | 第53-55页 |
| ·TNNI1 PCR扩增结果 | 第53页 |
| ·猪TNNI1基因序列以及基因组结构分析 | 第53-55页 |
| ·TNNI2基因组序列获得和序列分析 | 第55-57页 |
| ·TNNI2 PCR扩增结果 | 第55页 |
| ·猪TNNI2基因序列以及基因组结构分析 | 第55-57页 |
| ·TNNI3基因组序列获得和序列分析 | 第57-60页 |
| ·PCR扩增结果 | 第57-58页 |
| ·猪TNNI3基因序列以及基因组结构分析 | 第58-60页 |
| ·TnI基因家族基因组结构分析 | 第60页 |
| ·猪TNNI2基因多态性检测及其与生产性状的关联分析 | 第60-66页 |
| ·SNP的发掘 | 第60-62页 |
| ·TNNI2第3内含子SNP位点的PCR-RFLP建立 | 第62页 |
| ·TNNI2第3内含子遗传变异在不同猪种中的多态性 | 第62-64页 |
| ·猪TNNI2基因与生产性状的统计分析 | 第64-66页 |
| 4 猪TnI基因家族启动子的研究 | 第66-74页 |
| ·基因组步移文库的构建 | 第66页 |
| ·猪TNNI1基因启动子的获得及生物信息学分析 | 第66-69页 |
| ·猪TNNI1基因启动子的获得 | 第66-67页 |
| ·生物信息学预测猪TNNI1基因启动子转录因子结合位点 | 第67-69页 |
| ·猪TNNI2基因启动子的获得及生物信息学分析 | 第69-72页 |
| ·猪TNNI2基因启动子的获得 | 第69-70页 |
| ·生物信息学预测猪TNNI2基因启动子转录因子结合位点 | 第70-72页 |
| ·猪TNNI3基因启动子的获得及生物信息学分析 | 第72-74页 |
| ·猪TNNI3基因启动子的获得 | 第72页 |
| ·生物信息学预测猪TNNI3基因启动子转录因子结合位点 | 第72-74页 |
| 5 TnI基因家族的表达分析 | 第74-84页 |
| ·TNNI1基因的表达分析结果 | 第74-76页 |
| ·TNNI2基因的表达分析结果 | 第76-78页 |
| ·TNNI1和TNNI2基因的组织表达差异 | 第78-80页 |
| ·TNNI3基因在心肌中的表达分析 | 第80页 |
| ·TNNI1和TNNI3基因在心肌中的相对表达差异 | 第80-81页 |
| ·TnI基因家族组织表达谱分析 | 第81-84页 |
| 第五章 讨论 | 第84-93页 |
| 1 运用电子克隆策略和RACE技术获得新基因cDNA序列 | 第84-85页 |
| 2 TnI基因家族氨基酸序列分析 | 第85-86页 |
| 3 TnI基因基因组结构分析 | 第86-87页 |
| 4 SNP的研究 | 第87-88页 |
| 5 TNNI2-Sma I-RFLP的遗传效应 | 第88页 |
| 6 启动子克隆的方法 | 第88-89页 |
| 7 TnI基因家族启动子序列分析 | 第89-90页 |
| 8 实时定量PCR技术的应用 | 第90-91页 |
| 9 内参基因的选择 | 第91页 |
| 10 TnI基因家族的表达分析 | 第91-93页 |
| 下一步工作 | 第93-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 在读期间发表文章 | 第104页 |
