| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-17页 |
| 第一章 单纯疱疹病毒Ⅱ型的研究进展 | 第11-17页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型 | 第11-12页 |
| ·HSV-2 的感染流行现状 | 第12页 |
| ·HSV-2 感染过程 | 第12-13页 |
| ·HSV-2 感染与免疫 | 第13-14页 |
| ·HSV-2 感染与天然免疫 | 第13-14页 |
| ·HSV-2 感染与获得性免疫 | 第14页 |
| ·HSV-2 的疫苗研究概况 | 第14-16页 |
| ·展望 | 第16-17页 |
| 试验研究 | 第17-65页 |
| 第二章 HSV-2 在Vero 细胞上的培养、收获和病毒毒力测定 | 第17-23页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·细胞与病毒株 | 第17页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂的配制 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-20页 |
| ·Vero 细胞的复苏、冻存及培养 | 第18-19页 |
| ·HSV-2 333 株在Vero 细胞中的培养与收获 | 第19页 |
| ·HSV-2 333 株的纯化 | 第19页 |
| ·HSV-2 333 株半数组织感染量（TCID50）的测定 | 第19-20页 |
| ·HSV-2 333 株全病毒灭活与蛋白定量 | 第20页 |
| ·结果 | 第20-21页 |
| ·HSV-2 333 株感染Vero 细胞病变观察 | 第20页 |
| ·HSV-2 333 株病毒滴度测定结果 | 第20-21页 |
| ·HSV-2 333 株灭活后蛋白含量测定结果 | 第21页 |
| ·讨论 | 第21-23页 |
| 第三章 HSV-2 gD 融合gB CTL 表位重组蛋白gD-gBCTL 与gD 在杆状病毒表达系统中的表达 | 第23-41页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·基因、菌株与载体 | 第23页 |
| ·实验用细胞 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·目的基因的扩增 | 第26页 |
| ·目的基因的鉴定和胶回收 | 第26-27页 |
| ·连接克隆载体pMD18-T | 第27-28页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第28页 |
| ·转化后菌落PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的提取 | 第29页 |
| ·目的基因连接供体质粒pFastBac1 | 第29-30页 |
| ·DH10Bac~(TM) 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化DH10Bac~(TM) 与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组杆粒Bacmid-gD 与Bacmid-gD-gBCTL 的提取 | 第31页 |
| ·PCR 鉴定重组杆粒 | 第31-32页 |
| ·昆虫细胞的复苏、传代培养与冻存 | 第32-33页 |
| ·重组杆粒转染昆虫细胞 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒的收获 | 第34页 |
| ·重组杆状病毒的传代培养 | 第34页 |
| ·重组杆状病毒毒种的保存 | 第34页 |
| ·病毒毒力的测定 | 第34页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白的Western blot 鉴定 | 第35页 |
| ·目的蛋白的大量表达 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·目的基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·目的基因连接供体质粒pFastBac1 的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组杆粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒感染 sf9 昆虫细胞 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒毒力测定 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的Western blot 鉴定 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 重组蛋白gD-gBCTL 的原核表达与纯化 | 第41-53页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·基因、菌株与载体 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-48页 |
| ·引物的设计与合成 | 第43页 |
| ·目的基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·目的基因的鉴定和胶回收 | 第44页 |
| ·PCR 产物连接克隆载体pMD18-T | 第44页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第44-45页 |
| ·转化后菌落PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·目的基因表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·表达载体的酶切鉴定 | 第46页 |
| ·E. coli BL21 感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的Western blot 鉴定 | 第47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·重组蛋白的定量测定 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-52页 |
| ·gD-gBCTL 基因的扩增 | 第48页 |
| ·表达载体的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·gD-gBCTL 蛋白的诱导表达 | 第48-50页 |
| ·gD-gBCTL 蛋白的Western blot 鉴定 | 第50页 |
| ·gD-gBCTL 蛋白的纯化结果 | 第50-51页 |
| ·gD-gBCTL 蛋白的定量测定结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 原核表达重组蛋白 gD-gBCTL 免疫效果的初步评价 | 第53-65页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·抗原与病毒株 | 第53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·主要试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·实验动物分组及免疫程序 | 第54-55页 |
| ·动物血清与阴道灌洗液的制备 | 第55页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IgG 抗体 | 第55页 |
| ·ELISA 方法检测阴道灌洗液中sIgA 抗体 | 第55页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IgG 抗体亚型 | 第55-56页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IFN-γ的含量 | 第56页 |
| ·血清中和实验 | 第56-57页 |
| ·小鼠攻毒模型的建立 | 第57页 |
| ·小鼠攻毒方案 | 第57页 |
| ·攻毒后病变观察、体重称量与病毒含量测定 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-63页 |
| ·ELISA 方法检测小鼠血清中IgG 抗体效价 | 第57-58页 |
| ·ELISA 方法检测阴道灌洗液中sIgA 抗体效价 | 第58-59页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IgG 抗体亚型 | 第59页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IFN-γ的含量 | 第59-60页 |
| ·血清中和抗体 | 第60页 |
| ·小鼠攻毒模型建立结果 | 第60-61页 |
| ·小鼠攻毒试验结果 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 英文缩略词 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
