中文摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-14页 |
第一章 绪论 | 第14-33页 |
·玉米弯孢叶斑病 | 第14-19页 |
·病原菌 | 第15页 |
·病害症状 | 第15-16页 |
·弯孢菌致病因子 | 第16-17页 |
·发病规律和影响因素 | 第17-18页 |
·病害防治 | 第18-19页 |
·选育、种植抗病品种 | 第18-19页 |
·农业防治措施 | 第19页 |
·药剂防治 | 第19页 |
·玉米弯孢叶斑病菌侵染过程研究进展 | 第19-22页 |
·组织病理学研究 | 第19-21页 |
·相关抗病因子研究 | 第21-22页 |
·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化 | 第22-26页 |
·农杆菌介导转化的优点 | 第23-24页 |
·利用插入突变标记克隆相关基因 | 第24-26页 |
·荧光蛋白在植病研究中的应用 | 第26-29页 |
·绿色荧光蛋白(GFP) | 第26页 |
·红色荧光蛋白(DsRed) | 第26-27页 |
·荧光蛋白的结构和性质 | 第27-28页 |
·荧光蛋白在植物病理学研究的应用状况 | 第28-29页 |
·玉米弯孢叶斑病抗病性研究 | 第29-31页 |
·寄主对弯孢菌的抗性反应 | 第30页 |
·苗期与成株期抗病相关性 | 第30-31页 |
·抗病性遗传 | 第31页 |
·本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
·研究内容与技术路线 | 第32-33页 |
第二章 农杆菌介导的玉米弯孢叶斑病菌转化 | 第33-48页 |
·材料与方法 | 第33-39页 |
·实验材料 | 第33-35页 |
·菌株和质粒 | 第33页 |
·培养基和培养条件 | 第33-34页 |
·抗生素配制及使用浓度 | 第34-35页 |
·实验方法 | 第35-39页 |
·筛选转化子所需头孢噻肟钠浓度的检测 | 第35页 |
·筛选转化子所需潮霉素 B 浓度的检测 | 第35页 |
·真菌的遗传转化 | 第35-37页 |
·农杆菌的准备 | 第35页 |
·新月弯孢菌株的准备 | 第35-36页 |
·共培养 | 第36页 |
·共培养条件的优化 | 第36页 |
·阳性转化子的筛选 | 第36页 |
·突变体单菌落的获得 | 第36-37页 |
·突变体的分子鉴定 | 第37-38页 |
·总 DNA 快速提取 | 第37页 |
·突变体的 PCR 检测和 southern 杂交 | 第37-38页 |
·转化子的遗传稳定性验证 | 第38页 |
·转化子的荧光观察 | 第38-39页 |
·结果与分析 | 第39-46页 |
·头孢噻肟钠对农杆菌抑菌浓度的确定 | 第39页 |
·潮霉素 B 最适浓度的选择 | 第39-40页 |
·转化子的获得 | 第40-41页 |
·转化条件的优化 | 第41-43页 |
·分生孢子萌发时间对转化效率的影响 | 第41页 |
·共培养介质对转化效率的影响 | 第41-42页 |
·共培养温度和时间对转化效率的影响 | 第42-43页 |
·受体材料类型对转化效率的影响 | 第43页 |
·光照对转化效率的影响 | 第43页 |
·转化子的分子检测 | 第43-44页 |
·转化子稳定性分析 | 第44-45页 |
·转化子荧光观察 | 第45-46页 |
·讨论 | 第46-47页 |
·小结 | 第47-48页 |
第三章 转化子插入突变分析 | 第48-63页 |
·材料与方法 | 第48-53页 |
·材料 | 第48-49页 |
·供试菌株和寄主 | 第48页 |
·主要培养基配制 | 第48-49页 |
·方法 | 第49-53页 |
·转化子的生长特性 | 第49页 |
·突变体产孢量的测定 | 第49页 |
·转化子细胞壁降解酶活性测定 | 第49-50页 |
·细胞壁降解酶提取 | 第49页 |
·细胞壁降解酶活性测定 | 第49-50页 |
·转化子毒素的测定 | 第50-51页 |
·粗毒素的提取 | 第50-51页 |
·粗毒素的生物测定 | 第51页 |
·转化子致病性测定 | 第51页 |
·TAIL-PCR 获得插入位点侧翼序列 | 第51-53页 |
·结果 | 第53-60页 |
·转化子在不同 pH 培养基上的生长 | 第53-55页 |
·转化子产孢量的变化 | 第55页 |
·转化子细胞壁降解酶的合成 | 第55-57页 |
·转化子粗毒素的产生 | 第57-58页 |
·转化子的致病性 | 第58-59页 |
·荧光基因插入转化子位点分析 | 第59-60页 |
·讨论 | 第60-61页 |
·小结 | 第61-63页 |
第四章 荧光标记的新月弯孢对玉米侵染过程 | 第63-76页 |
·材料与方法 | 第63-66页 |
·材料 | 第63页 |
·供试菌株和供试自交系 | 第63页 |
·孢子悬浮液的配制 | 第63页 |
·方法 | 第63-66页 |
·接种方法 | 第63-64页 |
·荧光样品的制备 | 第64页 |
·扫描样品的制备 | 第64页 |
·RNA 样品的制备 | 第64页 |
·抗病相关基因转录水平分析 | 第64-66页 |
·新月弯孢的侵染玉米叶部引起的 PCD 分析 | 第66页 |
·新月弯孢对玉米根部的侵染 | 第66页 |
·结果与分析 | 第66-73页 |
·新月弯孢在感病材料中的侵染 | 第66-68页 |
·新月弯孢在不同抗性自交系叶片的侵染 | 第68-71页 |
·抗病相关基因转录水平差异 | 第71-72页 |
·DAB 染色法分析寄主细胞凋亡 | 第72-73页 |
·新月弯孢对玉米根部的侵染 | 第73页 |
·讨论 | 第73-75页 |
·小结 | 第75-76页 |
第五章 玉米弯孢叶斑病抗病资源筛选 | 第76-79页 |
·材料与方法 | 第76-77页 |
·抗性鉴定所用菌株及玉米资源 | 第76页 |
·玉米种质抗病性鉴定方法 | 第76-77页 |
·幼苗的准备: | 第76页 |
·接种液制备 | 第76-77页 |
·接种方法: | 第77页 |
·病情调查和抗性评价方法 | 第77页 |
·结果与分析 | 第77-78页 |
·玉米资源对弯孢叶斑病的抗性 | 第77-78页 |
·地方品种和自交系的抗性 | 第78页 |
·小结 | 第78-79页 |
第六章 结论 | 第79-81页 |
参考文献 | 第81-90页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第90-91页 |
附录 1 突变体 T-DNA 插入位点左侧序列 | 第91-94页 |
附录 2 玉米资源对弯孢叶斑病抗性鉴定结果 | 第94-100页 |
附录 3 新月弯孢分子孢子萌发形态 | 第100-101页 |
致谢 | 第101页 |