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玉米弯孢叶斑病菌的荧光标记及其对玉米侵染过程的研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 绪论第14-33页
   ·玉米弯孢叶斑病第14-19页
     ·病原菌第15页
     ·病害症状第15-16页
     ·弯孢菌致病因子第16-17页
     ·发病规律和影响因素第17-18页
     ·病害防治第18-19页
       ·选育、种植抗病品种第18-19页
       ·农业防治措施第19页
       ·药剂防治第19页
   ·玉米弯孢叶斑病菌侵染过程研究进展第19-22页
     ·组织病理学研究第19-21页
     ·相关抗病因子研究第21-22页
   ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化第22-26页
     ·农杆菌介导转化的优点第23-24页
     ·利用插入突变标记克隆相关基因第24-26页
   ·荧光蛋白在植病研究中的应用第26-29页
     ·绿色荧光蛋白(GFP)第26页
     ·红色荧光蛋白(DsRed)第26-27页
     ·荧光蛋白的结构和性质第27-28页
     ·荧光蛋白在植物病理学研究的应用状况第28-29页
   ·玉米弯孢叶斑病抗病性研究第29-31页
     ·寄主对弯孢菌的抗性反应第30页
     ·苗期与成株期抗病相关性第30-31页
     ·抗病性遗传第31页
   ·本研究的目的和意义第31-32页
   ·研究内容与技术路线第32-33页
第二章 农杆菌介导的玉米弯孢叶斑病菌转化第33-48页
   ·材料与方法第33-39页
     ·实验材料第33-35页
       ·菌株和质粒第33页
       ·培养基和培养条件第33-34页
       ·抗生素配制及使用浓度第34-35页
     ·实验方法第35-39页
       ·筛选转化子所需头孢噻肟钠浓度的检测第35页
       ·筛选转化子所需潮霉素 B 浓度的检测第35页
       ·真菌的遗传转化第35-37页
         ·农杆菌的准备第35页
         ·新月弯孢菌株的准备第35-36页
         ·共培养第36页
         ·共培养条件的优化第36页
         ·阳性转化子的筛选第36页
         ·突变体单菌落的获得第36-37页
       ·突变体的分子鉴定第37-38页
         ·总 DNA 快速提取第37页
         ·突变体的 PCR 检测和 southern 杂交第37-38页
       ·转化子的遗传稳定性验证第38页
       ·转化子的荧光观察第38-39页
   ·结果与分析第39-46页
     ·头孢噻肟钠对农杆菌抑菌浓度的确定第39页
     ·潮霉素 B 最适浓度的选择第39-40页
     ·转化子的获得第40-41页
     ·转化条件的优化第41-43页
       ·分生孢子萌发时间对转化效率的影响第41页
       ·共培养介质对转化效率的影响第41-42页
       ·共培养温度和时间对转化效率的影响第42-43页
       ·受体材料类型对转化效率的影响第43页
       ·光照对转化效率的影响第43页
     ·转化子的分子检测第43-44页
     ·转化子稳定性分析第44-45页
     ·转化子荧光观察第45-46页
   ·讨论第46-47页
   ·小结第47-48页
第三章 转化子插入突变分析第48-63页
   ·材料与方法第48-53页
     ·材料第48-49页
       ·供试菌株和寄主第48页
       ·主要培养基配制第48-49页
     ·方法第49-53页
       ·转化子的生长特性第49页
       ·突变体产孢量的测定第49页
       ·转化子细胞壁降解酶活性测定第49-50页
         ·细胞壁降解酶提取第49页
         ·细胞壁降解酶活性测定第49-50页
       ·转化子毒素的测定第50-51页
         ·粗毒素的提取第50-51页
         ·粗毒素的生物测定第51页
       ·转化子致病性测定第51页
       ·TAIL-PCR 获得插入位点侧翼序列第51-53页
   ·结果第53-60页
     ·转化子在不同 pH 培养基上的生长第53-55页
     ·转化子产孢量的变化第55页
     ·转化子细胞壁降解酶的合成第55-57页
     ·转化子粗毒素的产生第57-58页
     ·转化子的致病性第58-59页
     ·荧光基因插入转化子位点分析第59-60页
   ·讨论第60-61页
   ·小结第61-63页
第四章 荧光标记的新月弯孢对玉米侵染过程第63-76页
   ·材料与方法第63-66页
     ·材料第63页
       ·供试菌株和供试自交系第63页
       ·孢子悬浮液的配制第63页
     ·方法第63-66页
       ·接种方法第63-64页
       ·荧光样品的制备第64页
       ·扫描样品的制备第64页
       ·RNA 样品的制备第64页
       ·抗病相关基因转录水平分析第64-66页
       ·新月弯孢的侵染玉米叶部引起的 PCD 分析第66页
       ·新月弯孢对玉米根部的侵染第66页
   ·结果与分析第66-73页
     ·新月弯孢在感病材料中的侵染第66-68页
     ·新月弯孢在不同抗性自交系叶片的侵染第68-71页
     ·抗病相关基因转录水平差异第71-72页
     ·DAB 染色法分析寄主细胞凋亡第72-73页
     ·新月弯孢对玉米根部的侵染第73页
   ·讨论第73-75页
   ·小结第75-76页
第五章 玉米弯孢叶斑病抗病资源筛选第76-79页
   ·材料与方法第76-77页
     ·抗性鉴定所用菌株及玉米资源第76页
     ·玉米种质抗病性鉴定方法第76-77页
       ·幼苗的准备:第76页
       ·接种液制备第76-77页
       ·接种方法:第77页
     ·病情调查和抗性评价方法第77页
   ·结果与分析第77-78页
     ·玉米资源对弯孢叶斑病的抗性第77-78页
     ·地方品种和自交系的抗性第78页
   ·小结第78-79页
第六章 结论第79-81页
参考文献第81-90页
发表论文和参加科研情况说明第90-91页
附录 1 突变体 T-DNA 插入位点左侧序列第91-94页
附录 2 玉米资源对弯孢叶斑病抗性鉴定结果第94-100页
附录 3 新月弯孢分子孢子萌发形态第100-101页
致谢第101页

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