| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 鸭疫里默氏杆菌病原学 | 第13-14页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌分类地位 | 第13页 |
| ·细菌的形态及培养方式 | 第13-14页 |
| ·血清分型 | 第14页 |
| 2 鸭疫里默氏杆菌病诊断方法 | 第14-17页 |
| ·细菌分离鉴定 | 第14页 |
| ·血清学鉴定 | 第14-15页 |
| ·PCR检测 | 第15页 |
| ·间接ELISA检测 | 第15-16页 |
| ·免疫荧光抗体检测 | 第16页 |
| ·间接免疫组织化学法检测 | 第16-17页 |
| 3 蛋白质组学 | 第17-20页 |
| ·蛋白质组学概述 | 第17页 |
| ·双向电泳和质谱技术 | 第17-19页 |
| ·双向电泳(2-DE)相关技术 | 第17-18页 |
| ·质谱鉴定相关技术 | 第18-19页 |
| ·蛋白质组学在细菌学研究中的应用 | 第19-20页 |
| 4 限铁环境对细菌生长的影响 | 第20-22页 |
| 5 细菌分泌蛋白研究进展 | 第22-23页 |
| 第二章 1型鸭疫里默氏杆菌限铁环境下差异表达的分泌蛋白鉴定及免疫原性研究 | 第23-48页 |
| 1 研究的目的与意义 | 第23页 |
| 2 试验材料 | 第23-27页 |
| ·实验动物及饲养 | 第23-24页 |
| ·菌种与血清 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·主要溶液配制 | 第25-27页 |
| 3 试验方法 | 第27-34页 |
| ·细菌培养 | 第27-28页 |
| ·分泌蛋白的提取 | 第28页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第28页 |
| ·2-DE | 第28页 |
| ·表达差异蛋白的筛选 | 第28页 |
| ·差异蛋白的质谱鉴定 | 第28页 |
| ·鉴定免疫原性蛋白的筛选 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·模板DNA的提取 | 第29页 |
| ·PCR扩增及产物鉴定 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的构建及蛋白表达 | 第29-32页 |
| ·Fe10和Fe19基因与载体的连接 | 第29-30页 |
| ·质粒的构建与鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第30页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第31页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第31页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·纯化后包涵体蛋白浓度测定 | 第32页 |
| ·重组蛋白的Western-blotting分析 | 第32-33页 |
| ·电转 | 第32页 |
| ·封闭 | 第32页 |
| ·孵育血清 | 第32-33页 |
| ·孵育兔抗鸭IgY | 第33页 |
| ·显色 | 第33页 |
| ·Fe10和Fe19蛋白的免疫原性分析 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-45页 |
| ·限铁环境中RA生长曲线 | 第34页 |
| ·限铁环境培养RA分泌蛋白的2-DE图谱 | 第34-35页 |
| ·质谱鉴定 | 第35-41页 |
| ·基因的PCR扩增及测序结果 | 第41-42页 |
| ·基因的克隆及鉴定 | 第42页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化、浓度测定及Western-blotting分析 | 第42-44页 |
| ·蛋白的免疫原性分析 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-48页 |
| ·限铁环境培养RA | 第45页 |
| ·双向电泳 | 第45页 |
| ·差异蛋白筛选及质谱鉴定 | 第45-46页 |
| ·进行免疫原性鉴定的蛋白质的筛选以及表达 | 第46-47页 |
| ·动物免疫及攻毒试验 | 第47-48页 |
| 第三章 1型鸭疫里默氏杆菌ompA蛋白的表达与纯化及抗体检测方法的建立与应用 | 第48-69页 |
| 1 研究的目的与意义 | 第48页 |
| 2 试验材料 | 第48-49页 |
| ·实验动物及饲养 | 第48页 |
| ·菌株与血清 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·仪器设备 | 第49页 |
| ·主要溶液配制 | 第49页 |
| 3 试验方法 | 第49-55页 |
| ·ompA蛋白的克隆表达与纯化以及Western-blotting分析 | 第49-50页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·模板DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR产物的扩增及产物鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第50页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第50页 |
| ·蛋白的Western-blotting分析 | 第50页 |
| ·ompA间接ELISA检测方法的建立 | 第50-55页 |
| ·间接ELISA操作步骤 | 第50-51页 |
| ·ompA间接ELISA最佳包被浓度和血清稀释度的确定 | 第51页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第51页 |
| ·最佳封闭剂的确定 | 第51页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第51-52页 |
| ·最佳血清工作时间 | 第52页 |
| ·最佳酶标兔抗鸭IgY抗体工作浓度确定 | 第52页 |
| ·最佳酶标兔抗鸭IgY抗体工作时间的确定 | 第52-53页 |
| ·最佳显色时间确定 | 第53页 |
| ·阴阳性临界值确定 | 第53页 |
| ·间接ELISA的特异性试验 | 第53-54页 |
| ·交叉试验 | 第53-54页 |
| ·阻断试验 | 第54页 |
| ·间接ELISA的重复性试验 | 第54页 |
| ·间接ELISA检测方法与微量凝集试验敏感性比较 | 第54页 |
| ·标准曲线与回归方程的建立 | 第54页 |
| ·包被抗原保存期试验 | 第54-55页 |
| ·ELISA方法在RA灭活油乳剂疫苗免疫雏鸭后抗体消长规律的应用 | 第55页 |
| 4 结果与分析 | 第55-67页 |
| ·pET-28a(+)-ompA质粒的构建及重组ompA蛋白的表达与纯化 | 第55-56页 |
| ·ompA基因的PCR扩增及测序结果 | 第55页 |
| ·pET-28a(+)-opmA基因的克隆及鉴定 | 第55页 |
| ·ompA重组蛋白的表达及纯化 | 第55-56页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第56-65页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的确定 | 第56-57页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第57-58页 |
| ·最佳封闭剂的确定 | 第58-59页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第59页 |
| ·最佳血清工作时间的确定 | 第59页 |
| ·最佳酶标兔抗鸭IgY抗体工作浓度的确定 | 第59-60页 |
| ·最佳酶标兔抗鸭IgY抗体工作时间的确定 | 第60页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第60-61页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第61-62页 |
| ·间接ELISA的特异性试验 | 第62页 |
| ·交叉试验 | 第62页 |
| ·阻断试验 | 第62页 |
| ·间接ELISA检测方法与微量凝集试验敏感性比较 | 第62页 |
| ·间接ELISA的重复性试验 | 第62页 |
| ·间接ELISA标准曲线的建立 | 第62-65页 |
| ·包被抗原保存时间的确定 | 第65页 |
| ·RA灭活油乳剂疫苗免疫雏鸭后抗体消长规律 | 第65-67页 |
| 5 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 硕士期间发表论文 | 第80页 |
