| 中文摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 符号说明 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-50页 |
| ·糖基转移酶与寡糖的合成 | 第23-31页 |
| ·分类和机理 | 第24-26页 |
| ·糖核苷酸供体及其生物合成 | 第26-29页 |
| ·寡糖的酶法合成 | 第29-31页 |
| ·细菌细胞表面多糖 | 第31-40页 |
| ·细菌多糖的分类 | 第32-33页 |
| ·细菌多糖疫苗 | 第33-35页 |
| ·细菌多糖的生物合成 | 第35-38页 |
| ·大肠杆菌O86 | 第38-40页 |
| ·糖蛋白的合成-N糖基化 | 第40-45页 |
| ·真核生物蛋白质N-糖基化途径与OST | 第41-42页 |
| ·细菌蛋白质N-糖基化途径与PglB | 第42-45页 |
| ·生物芯片与糖阵列 | 第45-47页 |
| ·论文内容大纲 | 第47-50页 |
| 第二章 大肠杆菌双功能UDP-GlcNAc/Glc 4-位差向异构酶研究 | 第50-64页 |
| ·材料与方法 | 第50-54页 |
| ·材料与菌种 | 第50页 |
| ·基因克隆及表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| ·分子筛层析确定Gne蛋白多聚体状态 | 第52-53页 |
| ·圆二色谱分析Gne及其突变体S306Y的二级结构变化 | 第53页 |
| ·Gne蛋白酶活和理化特性测定 | 第53页 |
| ·Gne蛋白和突变体动力学研究 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-62页 |
| ·Gne序列分析 | 第54-55页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第55-56页 |
| ·Gne活性和理化性质 | 第56-57页 |
| ·Gne是双功能酶 | 第57-59页 |
| ·氨基酸S306决定Gne底物特异性 | 第59-62页 |
| ·讨论与总结 | 第62-64页 |
| 第三章 高通量糖基转移酶活性鉴定 | 第64-84页 |
| ·材料与方法 | 第66-74页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·菌种、DNA、质粒与培养条件 | 第66-67页 |
| ·糖基转移酶的克隆与质粒制备 | 第67-69页 |
| ·糖基转移酶体外表达与检测 | 第69-70页 |
| ·糖受体阵列制备 | 第70-73页 |
| ·高通量酶活鉴定 | 第73-74页 |
| ·体内蛋白表达与纯化 | 第74页 |
| ·寡糖合成与结构鉴定 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-82页 |
| ·糖基转移酶的选择与克隆 | 第74-75页 |
| ·体外表达糖基转移酶 | 第75-78页 |
| ·高通量鉴定糖基转移酶活性 | 第78-80页 |
| ·体内表达糖基转移酶 | 第80页 |
| ·寡糖合成与结构鉴定 | 第80-82页 |
| ·讨论与总结 | 第82-84页 |
| 第四章 O-多糖体外生物合成-Wzy与Wzz功能探讨 | 第84-104页 |
| ·材料与方法 | 第85-92页 |
| ·材料与菌种 | 第85页 |
| ·糖基转移酶的表达纯化 | 第85-86页 |
| ·LPS电泳分析 | 第86-87页 |
| ·构建E. coli O86:B7 (?)wecA (?)waaL | 第87-88页 |
| ·Wzy序列优化、克隆表达与纯化 | 第88-90页 |
| ·两种Wzz的表达纯化 | 第90页 |
| ·GalNAc-PP-Lipid底物化学合成 | 第90页 |
| ·酶法合成RU-PP-Lipid底物 | 第90-91页 |
| ·体外Wzy聚合反应以及有Wzz参与的聚合反应 | 第91-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-101页 |
| ·GalNAc-PP-Lipids化学合成与RU-PP-Lipids酶法合成 | 第92-94页 |
| ·Wzy体内为多糖聚合酶 | 第94-95页 |
| ·Wzy克隆、表达与纯化 | 第95-97页 |
| ·Wzy体外聚合O-PS重复单位 | 第97-99页 |
| ·Wzz控制O-PS聚合长度 | 第99页 |
| ·Wzy对底物脂链部分的具有松弛的特异性 | 第99-101页 |
| ·讨论与总结 | 第101-104页 |
| 第五章 细菌寡糖基转移酶PglB的理化性质研究 | 第104-118页 |
| ·材料与方法 | 第104-109页 |
| ·材料与菌种 | 第104-105页 |
| ·PglB表达载体构建 | 第105页 |
| ·PglB过量表达与纯化 | 第105-106页 |
| ·蛋白圆二色谱分析 | 第106页 |
| ·GalNAc-PP-Und和GalNAc-PP-pentaprenyl的化学制备 | 第106页 |
| ·PglB活性测定 | 第106-107页 |
| ·拓扑学结构测定方法 | 第107-109页 |
| ·结果与分析 | 第109-115页 |
| ·PglB过量表达与纯化 | 第109-110页 |
| ·重组PglB折叠正确 | 第110-111页 |
| ·重组PglB具有转糖基活性 | 第111-113页 |
| ·PglB拓扑学结构与STT3相似 | 第113-115页 |
| ·讨论与总结 | 第115-118页 |
| 全文总结 | 第118-120页 |
| 附录与附图 | 第120-152页 |
| Ⅰ. LIC克隆糖基转移酶所用的引物与模板 | 第121-124页 |
| Ⅱ. 高通量酶活鉴定所得MALDI-TOF/MS结果 | 第124-126页 |
| Ⅲ. 四种种蛋白纯化图 | 第126-127页 |
| Ⅳ. 四种寡糖的NMR图谱 | 第127-139页 |
| Ⅴ. 六种GalNAc-PP-Lipids结构和NMR、MS鉴定 | 第139-142页 |
| Ⅵ. 2-AB标记的E. coli O86RU-PP-Und合成中间体的MALDI-MS图 | 第142-144页 |
| Ⅶ. 所有E.coli O86RU-PP-Lipids的ESI-MS图 | 第144-146页 |
| Ⅷ. Wzy蛋白的nano-LC/MS/MS分析 | 第146-149页 |
| Ⅸ. PglB蛋白的nano-LC/MS/MS分析 | 第149-152页 |
| 参考文献 | 第152-166页 |
| 致谢 | 第166-168页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第168-172页 |
| 外文论文 | 第172-174页 |
| 发表论文 | 第174-195页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第195页 |
