中文摘要 | 第1-12页 |
Abstract | 第12-18页 |
第一章 绪论 | 第18-48页 |
·丝状真菌概述 | 第18-19页 |
·黑曲霉的概述 | 第19-22页 |
·产黄青霉的概述 | 第22-25页 |
·半纤维素酶的研究进展 | 第25-33页 |
·木聚糖酶概述 | 第26-29页 |
·木聚糖酶分子生物学的研究进展 | 第29-31页 |
·高温碱性木聚糖酶 | 第31-33页 |
·差异表达基因的克隆策略 | 第33-41页 |
·cDNA代表性差示分析代表性差示分析技术 | 第34-36页 |
·抑制性消减杂交(SSH) | 第36-38页 |
·基因鉴定集成法(IPGI) | 第38-40页 |
·微阵列技术 | 第40-41页 |
·丝状真菌的基因表达调控 | 第41-46页 |
·丝状真菌的顺式作用元件 | 第41-42页 |
·丝状真菌转录因子 | 第42-46页 |
本论文研究工作及意义 | 第46-48页 |
第二章 黑曲霉木聚糖酶高产突变株的选育与培养优化 | 第48-70页 |
·引言 | 第48页 |
·材料和方法 | 第48-55页 |
·菌株与质粒 | 第48页 |
·分子克隆用酶及试剂 | 第48-49页 |
·培养基 | 第49页 |
·仪器 | 第49-50页 |
·试验方法 | 第50-55页 |
·结果和分析 | 第55-69页 |
·木糖标准曲线 | 第55页 |
·紫外诱变最佳处理时间的选择 | 第55-57页 |
·DES诱变最佳处理时间的选择 | 第57-58页 |
·木聚糖酶高产突变株的筛选 | 第58-59页 |
·突变株An-19与出发菌株NA1003形态比较 | 第59-61页 |
·突变株An-19的遗传稳定性 | 第61-62页 |
·突变株An-19和出发菌株NA1003木聚糖酶基因的克隆 | 第62-64页 |
·黑曲霉突变株An-19产木聚糖酶培养基优化 | 第64-68页 |
·黑曲霉突变株An-19木聚糖酶酶学性质 | 第68-69页 |
·本章小结 | 第69-70页 |
第三章 黑曲霉抑制性消减杂交文库的构建及差异序列的分析 | 第70-88页 |
·引言 | 第70页 |
·材料与方法 | 第70-80页 |
·菌株和质粒 | 第70页 |
·培养基 | 第70-71页 |
·分子克隆用酶及试剂 | 第71页 |
·仪器 | 第71页 |
·试验方法 | 第71-80页 |
·试验结果和分析 | 第80-86页 |
·黑曲霉总RNA的分离 | 第80页 |
·黑曲霉抑制性消减杂交后两轮PCR扩增 | 第80-81页 |
·黑曲霉SSH文库插入片段大小的鉴定 | 第81-82页 |
·黑曲霉消减文库的逆向斑点杂交 | 第82-83页 |
·差异表达基因鉴定 | 第83-85页 |
·特异表达基因的RT-PCR分析 | 第85-86页 |
·本章小结 | 第86-88页 |
第四章 产黄青霉蛋白酶分离纯化及缺陷菌株的构建 | 第88-108页 |
·引言 | 第88-89页 |
·材料和方法 | 第89-95页 |
·菌株和质粒 | 第89页 |
·培养基 | 第89页 |
·主要生化试剂 | 第89-90页 |
·试验方法 | 第90-95页 |
·试验结果和分析 | 第95-106页 |
·产黄青霉FS010发酵液的硫酸铵盐析处理 | 第95-96页 |
·Q-Sepharose F.F.离子交换层析 | 第96页 |
·分子筛凝胶层析 | 第96-98页 |
·FS010蛋白酶酶学性质的研究 | 第98-101页 |
·产黄青霉FS010天冬氨酸蛋白酶A基因启动子和终止子的克隆 | 第101页 |
·pepA敲除载体p△pepA的构建 | 第101-103页 |
·产黄青霉转化及pepA基因缺陷株的筛选 | 第103-104页 |
·产黄青霉pepA缺陷菌株的胞外蛋白酶分泌 | 第104-105页 |
·产黄青霉pepA缺陷菌株的遗传稳定性 | 第105-106页 |
·本章小结 | 第106-108页 |
第五章 碱性木聚糖酶基因在产黄青霉中的高效表达 | 第108-122页 |
·引言 | 第108-109页 |
·材料和方法 | 第109-113页 |
·菌株和质粒 | 第109-110页 |
·培养基 | 第110页 |
·嗜碱杆菌碱性木聚糖酶基因序列的克隆与优化 | 第110页 |
·碱性木聚糖酶表达载体pxyl-1的构建 | 第110-111页 |
·产黄青霉原生质体的制备和转化方法 | 第111页 |
·转化子的PCR验证 | 第111页 |
·转化子的杂交验证 | 第111-112页 |
·pxyl-1转化子的RT-PCR分析 | 第112页 |
·转化子遗传稳定性的研究 | 第112页 |
·转化子发酵产重组木聚糖酶学特性研究 | 第112页 |
·蛋白质技术 | 第112-113页 |
·试验结果与分析 | 第113-121页 |
·嗜碱杆菌碱性木聚糖酶基因序列的克隆与优化 | 第113-114页 |
·碱性木聚糖酶表达载体pxyl-1的构建 | 第114-115页 |
·产黄青霉pxyl-1转化子的平板筛选和PCR验证 | 第115-116页 |
·产黄青霉pxyl-1转化子的Southern杂交分析 | 第116-117页 |
·RT-PCR检测pxyl-1转化子中碱性木聚糖酶基因的转录 | 第117-118页 |
·产黄青霉pxyl-1转化子胞外碱性木聚糖酶的SDS-PAGE分析 | 第118-119页 |
·产黄青霉pxyl-1转化子发酵产重组木聚糖酶学特性研究 | 第119-121页 |
·本章小结 | 第121-122页 |
全文总结 | 第122-124页 |
参考文献 | 第124-131页 |
在读博士期间发表论文 | 第131-132页 |
致谢 | 第132-133页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第133-134页 |
附件 | 第134-147页 |