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木聚糖诱导条件下黑曲霉特异基因表达分析及高表达碱性木聚糖酶产黄青霉菌株构建研究

中文摘要第1-12页
Abstract第12-18页
第一章 绪论第18-48页
   ·丝状真菌概述第18-19页
   ·黑曲霉的概述第19-22页
   ·产黄青霉的概述第22-25页
   ·半纤维素酶的研究进展第25-33页
     ·木聚糖酶概述第26-29页
     ·木聚糖酶分子生物学的研究进展第29-31页
     ·高温碱性木聚糖酶第31-33页
   ·差异表达基因的克隆策略第33-41页
     ·cDNA代表性差示分析代表性差示分析技术第34-36页
     ·抑制性消减杂交(SSH)第36-38页
     ·基因鉴定集成法(IPGI)第38-40页
     ·微阵列技术第40-41页
   ·丝状真菌的基因表达调控第41-46页
     ·丝状真菌的顺式作用元件第41-42页
     ·丝状真菌转录因子第42-46页
 本论文研究工作及意义第46-48页
第二章 黑曲霉木聚糖酶高产突变株的选育与培养优化第48-70页
   ·引言第48页
   ·材料和方法第48-55页
     ·菌株与质粒第48页
     ·分子克隆用酶及试剂第48-49页
     ·培养基第49页
     ·仪器第49-50页
     ·试验方法第50-55页
   ·结果和分析第55-69页
     ·木糖标准曲线第55页
     ·紫外诱变最佳处理时间的选择第55-57页
     ·DES诱变最佳处理时间的选择第57-58页
     ·木聚糖酶高产突变株的筛选第58-59页
     ·突变株An-19与出发菌株NA1003形态比较第59-61页
     ·突变株An-19的遗传稳定性第61-62页
     ·突变株An-19和出发菌株NA1003木聚糖酶基因的克隆第62-64页
     ·黑曲霉突变株An-19产木聚糖酶培养基优化第64-68页
     ·黑曲霉突变株An-19木聚糖酶酶学性质第68-69页
   ·本章小结第69-70页
第三章 黑曲霉抑制性消减杂交文库的构建及差异序列的分析第70-88页
   ·引言第70页
   ·材料与方法第70-80页
     ·菌株和质粒第70页
     ·培养基第70-71页
     ·分子克隆用酶及试剂第71页
     ·仪器第71页
     ·试验方法第71-80页
   ·试验结果和分析第80-86页
     ·黑曲霉总RNA的分离第80页
     ·黑曲霉抑制性消减杂交后两轮PCR扩增第80-81页
     ·黑曲霉SSH文库插入片段大小的鉴定第81-82页
     ·黑曲霉消减文库的逆向斑点杂交第82-83页
     ·差异表达基因鉴定第83-85页
     ·特异表达基因的RT-PCR分析第85-86页
   ·本章小结第86-88页
第四章 产黄青霉蛋白酶分离纯化及缺陷菌株的构建第88-108页
   ·引言第88-89页
   ·材料和方法第89-95页
     ·菌株和质粒第89页
     ·培养基第89页
     ·主要生化试剂第89-90页
     ·试验方法第90-95页
   ·试验结果和分析第95-106页
     ·产黄青霉FS010发酵液的硫酸铵盐析处理第95-96页
     ·Q-Sepharose F.F.离子交换层析第96页
     ·分子筛凝胶层析第96-98页
     ·FS010蛋白酶酶学性质的研究第98-101页
     ·产黄青霉FS010天冬氨酸蛋白酶A基因启动子和终止子的克隆第101页
     ·pepA敲除载体p△pepA的构建第101-103页
     ·产黄青霉转化及pepA基因缺陷株的筛选第103-104页
     ·产黄青霉pepA缺陷菌株的胞外蛋白酶分泌第104-105页
     ·产黄青霉pepA缺陷菌株的遗传稳定性第105-106页
   ·本章小结第106-108页
第五章 碱性木聚糖酶基因在产黄青霉中的高效表达第108-122页
   ·引言第108-109页
   ·材料和方法第109-113页
     ·菌株和质粒第109-110页
     ·培养基第110页
     ·嗜碱杆菌碱性木聚糖酶基因序列的克隆与优化第110页
     ·碱性木聚糖酶表达载体pxyl-1的构建第110-111页
     ·产黄青霉原生质体的制备和转化方法第111页
     ·转化子的PCR验证第111页
     ·转化子的杂交验证第111-112页
     ·pxyl-1转化子的RT-PCR分析第112页
     ·转化子遗传稳定性的研究第112页
     ·转化子发酵产重组木聚糖酶学特性研究第112页
     ·蛋白质技术第112-113页
   ·试验结果与分析第113-121页
     ·嗜碱杆菌碱性木聚糖酶基因序列的克隆与优化第113-114页
     ·碱性木聚糖酶表达载体pxyl-1的构建第114-115页
     ·产黄青霉pxyl-1转化子的平板筛选和PCR验证第115-116页
     ·产黄青霉pxyl-1转化子的Southern杂交分析第116-117页
     ·RT-PCR检测pxyl-1转化子中碱性木聚糖酶基因的转录第117-118页
     ·产黄青霉pxyl-1转化子胞外碱性木聚糖酶的SDS-PAGE分析第118-119页
     ·产黄青霉pxyl-1转化子发酵产重组木聚糖酶学特性研究第119-121页
   ·本章小结第121-122页
全文总结第122-124页
参考文献第124-131页
在读博士期间发表论文第131-132页
致谢第132-133页
学位论文评阅及答辩情况表第133-134页
附件第134-147页

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