| 目录 | 第1-6页 |
| 符号说明 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| ·哺乳动物骨发生过程及相关的信号通路与分子 | 第12-14页 |
| ·p204的生物学作用 | 第14-15页 |
| ·模式动物斑马鱼 | 第15-17页 |
| ·研究思路及意义 | 第17-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-35页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第19-22页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·主要实验试剂 | 第19-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-35页 |
| ·p204-EGFP融合蛋白表达载体的构建 | 第22-28页 |
| ·斑马鱼基因组DNA的提取与检测 | 第22页 |
| ·巢式PCR法扩增post(promoter of osteocalcin) | 第22-23页 |
| ·p204的扩增 | 第23-24页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-28页 |
| ·将构建好的表达载体显微注射到斑马鱼受精卵中 | 第28-29页 |
| ·显微注射针的制作 | 第28页 |
| ·胚胎注射 | 第28-29页 |
| ·p204注射后的表达检测 | 第29-35页 |
| ·荧光显微观察 | 第29页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第29-31页 |
| ·原位杂交 | 第31-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-46页 |
| ·p204-EGFP表达载体构建结果 | 第35-38页 |
| ·斑马鱼基因组DNA提取后检测结果 | 第35页 |
| ·巢式PCR扩增post检测结果 | 第35-36页 |
| ·pEGFP-N1质粒扩增后检测结果 | 第36-37页 |
| ·p204基因的扩增检测结果 | 第37页 |
| ·pEGFP-post,pEGFP-p204,pEGFP-post-p204载体构建结果 | 第37-38页 |
| ·p204注射后产生的畸形胚胎及统计分析 | 第38-39页 |
| ·p204注射后表达检测结果 | 第39-46页 |
| ·p204荧光显微观察结果 | 第39-40页 |
| ·real-time RT-PCR结果 | 第40-44页 |
| ·runx2b原位杂交实验结果 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-53页 |
| ·p204注射诱导产生斑马鱼畸形胚胎 | 第46-47页 |
| ·p204注射到斑马鱼胚胎中的表达模式 | 第47-48页 |
| ·runx2b原位杂交 | 第48页 |
| ·斑马鱼基因组的提取 | 第48-49页 |
| ·巢式PCR方法扩增启动子序列 | 第49-51页 |
| ·启动子序列的测定 | 第51页 |
| ·斑马鱼用于研究骨发生机制的展望 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 附图 | 第54-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第69页 |