| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-44页 |
| ·前言 | 第20页 |
| ·糖生物学的发展 | 第20-21页 |
| ·寡糖的制备技术 | 第21-24页 |
| ·化学合成法 | 第21-22页 |
| ·多糖降解法 | 第22-24页 |
| ·酶法合成寡糖技术 | 第24页 |
| ·利用重组大肠细菌进行寡糖合成的研究进展 | 第24-34页 |
| ·细菌糖基转移酶的来源及克隆 | 第25页 |
| ·糖核苷酸的供给 | 第25-29页 |
| ·寡糖合成途径的构建 | 第29-33页 |
| ·研发前景及存在的问题 | 第33-34页 |
| ·结瘤因子的活性及其生物合成 | 第34-39页 |
| ·根瘤菌的分类及豆科植物的固氮机理 | 第34页 |
| ·结瘤因子的结构及其生物合成 | 第34-37页 |
| ·NodC蛋白的研究进展 | 第37-38页 |
| ·NodB蛋白的研究进展 | 第38-39页 |
| ·UDP-GlcNAc在细菌细胞内的代谢途径 | 第39-40页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第40-43页 |
| ·立题依据 | 第40-42页 |
| ·本论文研究的意义 | 第42-43页 |
| ·论文的主要研究内容和拟解决的关键问题 | 第43-44页 |
| ·研究内容 | 第43页 |
| ·拟解决的关键问题 | 第43-44页 |
| 第二章 重组nodC基因的克隆和表达载体的构建与筛选 | 第44-71页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·试验材料 | 第44-52页 |
| ·菌株 | 第44-45页 |
| ·基因、质粒和引物 | 第45-50页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第50-51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·溶液 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·试验及分析方法 | 第53-58页 |
| ·根瘤菌基因组的提取 | 第53页 |
| ·目的基因的琼脂糖凝胶回收 | 第53-54页 |
| ·目的基因与载体的限制性内切酶消化反应 | 第54-55页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·目的基因与载体的连接反应 | 第55页 |
| ·大肠杆菌转化试验 | 第55-56页 |
| ·重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养 | 第56页 |
| ·培养液和重组大肠杆菌细胞中几丁寡糖含量的测定 | 第56-57页 |
| ·重组大肠杆菌培养液细胞干重含量的测定和计算 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-69页 |
| ·不同大肠杆菌菌株对几丁寡糖合成的影响 | 第58-60页 |
| ·重组nodCL基因克隆 | 第60-63页 |
| ·不同nodCL表达载体的产糖能力的测定结果 | 第63-66页 |
| ·NodCM表达载体pUC-CM3的构建 | 第66-68页 |
| ·重组nodC基因对寡糖合成的影响 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 第三章 利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究 | 第71-97页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·试验材料 | 第72-73页 |
| ·菌株 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72-73页 |
| ·主要试验试剂 | 第73页 |
| ·主要试验仪器 | 第73-75页 |
| ·试验及分析方法 | 第75-80页 |
| ·重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养 | 第75页 |
| ·10 L发酵罐非补料模式的培养方式 | 第75页 |
| ·10 L发酵罐补料模式的同步法培养方式 | 第75页 |
| ·10 L发酵罐补料模式的二步法培养方式 | 第75-76页 |
| ·培养液中重组大肠杆菌细胞干重的测定方法 | 第76页 |
| ·培养液上清中N-乙酰氨基葡萄糖含量的测定 | 第76页 |
| ·重组大肠杆菌细胞内几丁寡糖浓度的测定方法 | 第76页 |
| ·重组大肠杆菌培养液中UDP-GlcNAc浓度的测定 | 第76-78页 |
| ·寡糖产物的分离纯化及产物鉴定 | 第78-80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-93页 |
| ·培养基组分对重组大肠杆菌生长和几丁寡糖合成的影响 | 第80-81页 |
| ·不同乙酰氨基葡萄糖添加水平的培养结果 | 第81-82页 |
| ·不同培养基对细胞内UDP-GlcNAc浓度的影响 | 第82-84页 |
| ·DCL3的同步法发酵结果 | 第84-86页 |
| ·DCL3的二步法发酵结果 | 第86-87页 |
| ·几丁寡糖产物的分离纯化鉴定 | 第87-93页 |
| ·本章小结 | 第93-97页 |
| 第四章 利用重组NodC大肠杆菌合成几丁寡糖衍生物的研究 | 第97-115页 |
| ·引言 | 第97页 |
| ·材料和方法 | 第97-101页 |
| ·菌株 | 第97页 |
| ·主要实验仪器与试剂 | 第97-98页 |
| ·培养基 | 第98页 |
| ·试验方法 | 第98-101页 |
| ·结果与讨论 | 第101-113页 |
| ·几丁寡糖烯丙基衍生物合成的发酵培养结果 | 第101-102页 |
| ·几丁寡糖甲基衍生物合成的发酵培养结果 | 第102-103页 |
| ·培养液测定结果 | 第103-105页 |
| ·活性炭吸附洗脱的纯化试验结果 | 第105-106页 |
| ·P-4凝胶层析纯化结果 | 第106-107页 |
| ·几丁寡糖产物的HPLC分析结果 | 第107-109页 |
| ·制备液相分离纯化结果 | 第109页 |
| ·制备色谱分离组分的几丁寡糖含量的测定结果 | 第109-110页 |
| ·TLC层析结果 | 第110页 |
| ·ESI-MS分析结果 | 第110-113页 |
| ·NMR分析结果 | 第113页 |
| ·本章小结 | 第113-115页 |
| 第五章 重组去乙酰基水解酶(nodBprotein)的表达及其活性鉴定 | 第115-133页 |
| ·引言 | 第115页 |
| ·试验菌株 | 第115页 |
| ·主要试验材料 | 第115-116页 |
| ·主要实验仪器 | 第116页 |
| ·培养基 | 第116-117页 |
| ·试验方法 | 第117-126页 |
| ·试验操作流程 | 第117页 |
| ·根瘤菌的培养及基因组 | 第117页 |
| ·重组nodB基因的克隆及表达载体的构建 | 第117-122页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达 | 第122页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第122-123页 |
| ·包含体的处理 | 第123页 |
| ·亲和层析纯化重组NodB蛋白 | 第123-124页 |
| ·重组NodB蛋白贮存液的制备 | 第124页 |
| ·NodB酶解体系 | 第124页 |
| ·酶解寡糖产物的分离纯化 | 第124-125页 |
| ·分析方法 | 第125-126页 |
| ·结果与讨论 | 第126-131页 |
| ·重组nodB基因表达载体的构建及转化结果 | 第126页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第126-128页 |
| ·重组NodB蛋白的诱导表达结果 | 第128-131页 |
| ·本章小结 | 第131-133页 |
| 第六章 论文总结 | 第133-138页 |
| ·取得的研究结果 | 第133-136页 |
| ·结果讨论 | 第136-138页 |
| References | 第138-146页 |
| 在读期间论文及专利 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第148-149页 |
| 附录 | 第149-167页 |
