| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-37页 |
| ·鸡球虫病的危害及防治现状 | 第18-19页 |
| ·鸡球虫细胞培养的研究现状及进展 | 第19-23页 |
| ·球虫细胞培养体系的筛选及优化 | 第19-20页 |
| ·细胞培养技术在抗球虫制剂评价方面的应用 | 第20-21页 |
| ·细胞培养技术在球虫蛋白研究方面的应用 | 第21-22页 |
| ·细胞培养技术在球虫基因转染研究方面的应用 | 第22页 |
| ·细胞培养技术在球虫入侵机理研究方面的应用 | 第22-23页 |
| ·展望 | 第23页 |
| ·原虫的丝氨酸蛋白酶抑制因子（Serpin）研究进展 | 第23-29页 |
| ·Serpin 的结构及分类 | 第24页 |
| ·Serpin 的功能 | 第24-25页 |
| ·几种原虫的Serpin 的研究进展 | 第25-29页 |
| ·展望 | 第29页 |
| ·顶复器原虫顶体膜抗原1（AMA1）的研究进展 | 第29-37页 |
| ·AMA1 的结构特征 | 第30页 |
| ·AMA1 的生物合成和运输 | 第30-31页 |
| ·AMA1 的形态多态性 | 第31-32页 |
| ·AMA1 的功能作用 | 第32-33页 |
| ·AMA1 的天然免疫原性 | 第33页 |
| ·AMA1 的疫苗研制 | 第33-34页 |
| ·其他原虫的AMA1 研究进展 | 第34-36页 |
| ·展望 | 第36-37页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫 DF-1 细胞培养体系的建立 | 第37-46页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-40页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·实验虫株及细胞株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫子孢子的制备 | 第38-39页 |
| ·DF-1 细胞培养和制备 | 第39页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫的DF-1 细胞培养体系建立 | 第39页 |
| ·不同培养温度下子孢子在DF-1 细胞中的发育 | 第39页 |
| ·其他鸡球虫在DF-1 细胞体系的培养 | 第39页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子在 DF-1 细胞体系的培养 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-44页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子的收集和纯化 | 第40-41页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫的DF-1 细胞培养体系建立 | 第41页 |
| ·不同培养温度下子孢子在DF-1 细胞中的发育 | 第41-42页 |
| ·其他鸡球虫在DF-1 细胞体系的培养 | 第42-43页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子在DF-1 细胞体系的培养 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 DF-1 细胞培养体系在子孢子入侵活力检测中的应用 | 第46-56页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料和方法 | 第46-49页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·实验虫株及细胞株 | 第46-47页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫子孢子的制备 | 第47页 |
| ·子孢子入侵DF-1 细胞的活力检测 | 第47-48页 |
| ·子孢子入侵五种培养细胞的活力比较 | 第48页 |
| ·促进虫体入侵DF-1 细胞的培养条件优化 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫子孢子的荧光标记 | 第49页 |
| ·子孢子入侵DF-1 细胞后的定量检测 | 第49-51页 |
| ·子孢子入侵活力的最佳检测时间确定 | 第51页 |
| ·荧光标记子孢子的最佳保存时间 | 第51-52页 |
| ·子孢子对五种培养细胞的入侵活力比较 | 第52页 |
| ·促进虫体入侵DF-1 细胞的培养条件优化 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫的 Serpin 基因和 AMA1 基因的克隆与生物信息学分析 | 第56-82页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-66页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·实验虫株 | 第56页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·EST 来源 | 第57页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫子孢子的收集 | 第57页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫子孢子总 RNA 的提取 | 第57-58页 |
| ·目的基因的3’ 和5’ RACE 扩增 | 第58-59页 |
| ·扩增 3’cDNA 末端和 5’cDNA 末端 | 第59-60页 |
| ·Nested PCR | 第60-61页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第61页 |
| ·回收PCR 产物的连接转化 | 第61-62页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定及测序 | 第62页 |
| ·目的基因全长序列的拼接 | 第62页 |
| ·目的基因全长cDNA 序列的扩增 | 第62-63页 |
| ·目的基因全长cDNA 的克隆和测序 | 第63页 |
| ·目的基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第63-64页 |
| ·目的基因在不同发育时期虫体的表达分析 | 第64-66页 |
| ·结果 | 第66-79页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体总RNA 的提取 | 第66页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫BG611 和BG589 基因全长cDNA 的获取 | 第66-67页 |
| ·BG611 基因 cDNA 序列的生物信息学分析 | 第67-73页 |
| ·BG589 基因 cDNA 序列的生物信息学分析 | 第73-78页 |
| ·目的基因在不同发育阶段虫体的表达分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫Serpin 基因的原核表达及功能初步研究 | 第82-106页 |
| ·引言 | 第82页 |
| ·材料与方法 | 第82-92页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-92页 |
| ·结果 | 第92-103页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第92页 |
| ·rEtSerpin 在大肠杆菌中的表达 | 第92-93页 |
| ·rEtSerpin 的包涵体纯化 | 第93-94页 |
| ·rEtSerpin 的抗原性分析 | 第94页 |
| ·rEtSerpin 抑制蛋白酶活性效果测定 | 第94-96页 |
| ·抗rEtSerpin 多抗血清对虫体天然蛋白的识别 | 第96页 |
| ·rEtSerpin 多抗血清对子孢子入侵细胞的抑制作用 | 第96-97页 |
| ·EtSerpin 的体外荧光定位 | 第97-98页 |
| ·EtSerpin 的鸡组织荧光定位 | 第98-102页 |
| ·rEtSerpin 的免疫保护性试验 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| 第六章 柔嫩艾美耳球虫AMA1 基因的原核表达及功能初步研究 | 第106-123页 |
| ·引言 | 第106页 |
| ·材料与方法 | 第106-110页 |
| ·材料 | 第106-107页 |
| ·实验方法 | 第107-110页 |
| ·结果 | 第110-121页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第110-111页 |
| ·rEtAMA1 在大肠杆菌中的表达 | 第111-112页 |
| ·rEtAMA1 的抗原性分析 | 第112页 |
| ·rEtAMA1 特异多抗血清对子孢子入侵细胞的抑制作用 | 第112-113页 |
| ·EtAMA1 的体外荧光定位 | 第113-114页 |
| ·EtAMA1 的鸡组织荧光定位 | 第114-118页 |
| ·rEtAMA1 的免疫保护性试验 | 第118-121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| 第七章 全文结论 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 附录 | 第137-139页 |
| 作者简历 | 第139-141页 |
