| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第13-15页 |
| ·抑制性消减杂交技术基本原理 | 第13页 |
| ·抑制消减杂交技术的操作过程 | 第13-14页 |
| ·抑制消减杂交技术的特点 | 第14-15页 |
| ·SSH 技术与其它差异显示技术的比较 | 第15-21页 |
| ·限制性酶切片段差异显示技术 | 第16-17页 |
| ·代表性差异分析 | 第17-18页 |
| ·mRNA 差异显示技术 | 第18-19页 |
| ·基因表达系列分析 | 第19-20页 |
| ·cDNA 微阵列技术 | 第20-21页 |
| ·SSH 技术与其它差异显示方法的比较 | 第21页 |
| ·SSH 技术在鱼类免疫基因克隆中的应用 | 第21-29页 |
| ·鱼类的白细胞介素(interleukins,ILs)基因 | 第22-23页 |
| ·趋化因子(chemokine)基因 | 第23-24页 |
| ·肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)基因 | 第24-25页 |
| ·溶菌酶(Lysozyme)基因 | 第25-26页 |
| ·NK细胞增强因子(NKEF)基因 | 第26页 |
| ·补体(complement component)基因 | 第26-28页 |
| ·干扰素基因 | 第28-29页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-56页 |
| ·实验动物和菌株来源 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·试剂和仪器 | 第31-32页 |
| ·菌液制备 | 第32页 |
| ·大菱鲆的感染和组织的获取 | 第32页 |
| ·大菱鲆肾组织和脾组织总RNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·mRNA 的纯化 | 第33页 |
| ·mRNA 的纯化准备 | 第33页 |
| ·mRNA 的纯化步骤 | 第33页 |
| ·差减cDNA 文库的建立 | 第33-41页 |
| ·合成双链cDNA | 第34-35页 |
| ·cDNA RsaI 酶切 | 第35-36页 |
| ·Tester cDNA 的制备——接头连接 | 第36-38页 |
| ·二轮差减杂交 | 第38-39页 |
| ·二轮差减 PCR 鉴定 | 第39-41页 |
| ·差减文库克隆 | 第41-44页 |
| ·斑点杂交 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆序列测序 | 第45页 |
| ·RACE 技术扩增 MHC class Ia 全长 | 第45-53页 |
| ·RACE 的原理和技术路线 | 第45-47页 |
| ·RACE 步骤 | 第47-53页 |
| ·引物的设计 | 第47-48页 |
| ·反转录合成第一链 | 第48-49页 |
| ·5’和3’RACE PCR 反应 | 第49-51页 |
| ·RACE PCR 扩增片断的纯化与回收 | 第51-52页 |
| ·RACE PCR 扩增片断的克隆 | 第52-53页 |
| ·Real-time PCR | 第53-56页 |
| ·标准品的制备 | 第53页 |
| ·定量 PCR 引物的设计 | 第53-54页 |
| ·标准品和待测样品 Ct 值范围的校正 | 第54页 |
| ·MHC class Ia 基因的Real-time PCR 表达分析 | 第54-56页 |
| 3. 结果与分析 | 第56-73页 |
| ·大菱鲆总RNA 的电泳检测 | 第56页 |
| ·mRNA 纯度及浓度的检测 | 第56-57页 |
| ·差减文库的构建 | 第57-59页 |
| ·cDNA RsaI 酶切 | 第57页 |
| ·Tester cDNA 接头连接效率的检测 | 第57-58页 |
| ·消减效率的检测 | 第58-59页 |
| ·差减文库的克隆鉴定 | 第59-60页 |
| ·斑点杂交 | 第60-62页 |
| ·阳性克隆片断的同源性分析 | 第62-64页 |
| ·MHC class Ia 基因全序列扩增 | 第64-69页 |
| ·MHC class Ia 基因的 3’RACE PCR 和5’RACE PCR 的扩增 | 第64-65页 |
| ·MHC class Ia 序列分析 | 第65-67页 |
| ·MHC class Ia 氨基酸序列同源性分析 | 第67-69页 |
| ·Real-time PCR | 第69-73页 |
| ·Real-time PCR 标准品的制备 | 第69-70页 |
| ·MHC class Ia 基因的Real-time PCR 表达分析 | 第70-72页 |
| ·MHC class Ia 基因在实验组和对照组的相对表达量 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 I 溶液配方 | 第84-85页 |
| 附录 II PCR primer1, adaptor1, adaptor2R和Rsa I酶切位 点序列 | 第85-87页 |
| 附录 IV 攻读硕士期间发表和撰写的文章 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
