利用噬菌体12肽库筛选生长抑素的抗原模拟表位
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-16页 |
| ·生长抑素的结构 | 第8-9页 |
| ·生长抑素的分布 | 第9页 |
| ·生长抑素在神经系统的分布 | 第9页 |
| ·生长抑素在神经系统外的分布 | 第9页 |
| ·生长抑素的生理作用 | 第9-10页 |
| ·生长抑素对腺垂体 GH分泌的调节作用 | 第9-10页 |
| ·生长抑素对下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响 | 第10页 |
| ·生长抑素对下丘脑-垂体-性腺轴的影响 | 第10页 |
| ·生长抑素对胃肠胰的作用 | 第10页 |
| ·生长抑素受体 | 第10-11页 |
| ·生长抑素的的人工调控 | 第11-13页 |
| ·生长抑素化学耗竭剂 | 第11页 |
| ·生长抑素疫苗 | 第11-13页 |
| ·抗原表位的研究方法 | 第13-16页 |
| ·肽探针扫描技术(交叠合成多肽法) | 第13页 |
| ·X射线衍射技术和核磁共振(NMR)技术 | 第13-14页 |
| ·化学“切割”法或酶法 | 第14页 |
| ·抗原表位的预测方法 | 第14页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第14-16页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-29页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·质粒与菌株 | 第17页 |
| ·试验用疫苗 | 第17页 |
| ·试验动物 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·细菌培养基和抗生素 | 第17页 |
| ·E.coli感受态制备用试剂 | 第17-18页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第18页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第18页 |
| ·IgG纯化相关溶液 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-29页 |
| ·ss基因的获得 | 第19-20页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第20页 |
| ·DNA片段的快速回收 | 第20页 |
| ·连接 | 第20-21页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第21页 |
| ·连接产物的转化 | 第21-22页 |
| ·质粒的提取 | 第22页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第22-23页 |
| ·动物免疫程序 | 第23页 |
| ·分离血清 | 第23页 |
| ·健康兔血清 IgG的粗提及纯化 | 第23-24页 |
| ·粗提兔血清 IgG的纯化 | 第24-25页 |
| ·噬菌体滴度的测定 | 第25-26页 |
| ·淘选程序(固定靶蛋白) | 第26-27页 |
| ·噬菌斑的扩增以及测序模板的快速纯化 | 第27页 |
| ·用 ELISA检测所选多肽对靶蛋白的结合 | 第27-28页 |
| ·阳性噬菌体克隆测序及序列分析 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-33页 |
| ·生长抑素基因的克隆与表达 | 第29-30页 |
| ·ss基因片段的退火产物(图2) | 第29页 |
| ·pET-32a-ss重组质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE检测 | 第29-30页 |
| ·兔抗SS血清 IgG的制备与纯化 | 第30-33页 |
| ·兔抗SS血清 IgG浓度 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶 | 第30-33页 |
| 5 讨论 | 第33-36页 |
| ·生长抑素的克隆与表达 | 第33页 |
| ·SS抗体 IgG的制备与纯化 | 第33-34页 |
| ·噬菌体随机肽库筛选 | 第34页 |
| ·噬菌体筛选后同源性分析 | 第34-36页 |
| 6. 小结 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 致谢 | 第40页 |
