| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| 1 植物抗虫基因工程研究进展 | 第9-13页 |
| ·来源于微生物的抗虫基因 | 第9-10页 |
| ·来源于高等植物的抗虫基因 | 第10-12页 |
| ·来源于动物的抗虫基因 | 第12-13页 |
| 2 提高外源抗虫基因在植物体内的表达 | 第13-14页 |
| ·对非必需区段进行缺失处理 | 第13页 |
| ·基因改造 | 第13页 |
| ·利用定位信号提高基因表达 | 第13页 |
| ·利用基质结合区提高基因表达 | 第13-14页 |
| ·叶绿体转化 | 第14页 |
| ·改进T I质粒 | 第14页 |
| 3 植物抗虫基因工程存在的主要问题及解决措施 | 第14-16页 |
| ·抗虫基因的基因沉默 | 第14-15页 |
| ·抗虫转基因工程中昆虫的抗性问题 | 第15-16页 |
| ·转抗虫基因植物潜在的生态风险性 | 第16页 |
| 4 植物转化与番茄基因改良 | 第16-20页 |
| ·植物转化 | 第16-18页 |
| ·番茄遗传转化与品种改良的研究进展 | 第18-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-39页 |
| 1.实验材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·质粒和菌种 | 第20页 |
| ·试剂盒、酶类及抗体 | 第20页 |
| ·PCR引物 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·植物激素、抗生素及其他化学试剂： | 第22页 |
| ·实验器具及其他： | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-39页 |
| ·植物表达双价抗虫载体pCAMBIA3300-PTA-CRYLA的构建 | 第22-28页 |
| ·番茄的组织培养 | 第28-32页 |
| ·转化番茄的鉴定与分析 | 第32-33页 |
| ·转化番茄植株的分子生物学检测 | 第33-37页 |
| ·转化番茄的除草剂抗性检测 | 第37-38页 |
| ·转化番茄的遗传学分析 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-56页 |
| 1 重组质粒的载体构建 | 第39-40页 |
| ·APALⅠ单酶切鉴定重组质粒P3300-BT | 第39页 |
| ·重组质粒及XHOⅠ和KPNⅠ双酶切鉴定重组质粒图谱 | 第39-40页 |
| 2 番茄转化的优化体系的建立 | 第40-49页 |
| ·外植体的选择 | 第40-41页 |
| ·外植体最适生长条件的优化 | 第41-43页 |
| ·农杆菌侵染条件的优化 | 第43-47页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第47-48页 |
| ·选择剂选择浓度对转化率的影响 | 第48页 |
| ·抑菌素的选择及用量对转化率的影响 | 第48-49页 |
| ·转化后番茄的再生率 | 第49页 |
| 3 转化植株组织化学及分子生物学检测 | 第49-52页 |
| ·CRYIAC基因的GUS组织化学分析 | 第49-50页 |
| ·CRYIAC基因的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·CRYIAC基因的RT-PCR检测 | 第51页 |
| ·CRYIAC基因的SOUTHERN杂交检测 | 第51-52页 |
| 4 转基因番茄的除草剂抗性检测 | 第52-53页 |
| 5 转化番茄的遗传学检测 | 第53-54页 |
| ·TL代植株的CRYIAC基因的分离 | 第54页 |
| ·双价抗虫基因在TL代的分离 | 第54页 |
| 6 TL代转基因植株的抗虫鉴定 | 第54-56页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第56-59页 |
| 1 双价抗虫载体的构建 | 第56页 |
| 2 番茄转化系统的优化 | 第56-57页 |
| ·影响番茄再生的主要因素 | 第56-57页 |
| ·影响农杆菌介导番茄转化的主要因素 | 第57页 |
| 3 转基因番茄的遗传分离 | 第57-58页 |
| 4 抗虫鉴定 | 第58页 |
| 5 转抗虫基因蔬菜的安全性评价 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |