| 原创性声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 名词缩写 | 第14-15页 |
| 文献综述 | 第15-48页 |
| 1 草菇概况 | 第15-20页 |
| ·草菇的分类地位 | 第15页 |
| ·草菇的形态和生活史 | 第15-16页 |
| ·草菇的价值 | 第16-17页 |
| ·草菇生长的环境条件 | 第17-19页 |
| ·草菇产后生理和保鲜 | 第19-20页 |
| 2 生物的低温胁迫生理应答研究进展 | 第20-31页 |
| ·植物的低温胁迫应答 | 第20-23页 |
| ·植物抗寒生理及其分子基础 | 第23-29页 |
| ·草菇低温胁迫下的生理变化研究进展 | 第29-31页 |
| 3 全长基因克隆方法的研究进展 | 第31-41页 |
| ·EST查询法 | 第31页 |
| ·RACE技术 | 第31-36页 |
| ·标记探针筛选cDNA文库 | 第36-41页 |
| 4 mRNA检测方法的研究进展 | 第41-46页 |
| ·Northern杂交法 | 第42页 |
| ·原位杂交 | 第42页 |
| ·RT-PCR定量法 | 第42-46页 |
| 5 本研究的目标、内容和技术路线 | 第46-48页 |
| 材料与方法 | 第48-84页 |
| 1 试验材料 | 第48页 |
| 2 试验培养基 | 第48页 |
| 3 菌种培养及保存 | 第48页 |
| 4 试验试剂 | 第48-55页 |
| 5 草菇菌丝的培养和处理 | 第55-56页 |
| 6 草菇基因组DNA的提取 | 第56页 |
| 7 草菇gpd基因片断的PCR扩增 | 第56页 |
| 8 草菇gpd基因片断的回收、纯化 | 第56-57页 |
| 9 草菇gpd基因片断的连接 | 第57页 |
| 10 草菇gpd基因片断的转化 | 第57-58页 |
| 11 阳性质粒的提取 | 第58-59页 |
| 12 阳性质粒的酶切鉴定 | 第59页 |
| 13 鉴定正确的阳性克隆测序 | 第59页 |
| 14 草菇gpd基因cDNA全长的获得 | 第59-63页 |
| 15 gpd全长基因的扩增 | 第63页 |
| 16 gpd基因上游序列的扩增 | 第63-65页 |
| 17 Southern杂交 | 第65-67页 |
| 18 Northern杂交 | 第67-68页 |
| 19 杂交信号检测 | 第68-69页 |
| 20 草菇低温cDNA文库的构建 | 第69-72页 |
| 21 草菇低温诱导相关基因的分离 | 第72-74页 |
| 22 阳性克隆的半定量RT-PCR检测 | 第74-75页 |
| 23 cor3基因的原核表达 | 第75-77页 |
| 24 目的蛋白的分离纯化 | 第77-78页 |
| 25 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第78-79页 |
| 26 等电聚焦凝胶电泳 | 第79-80页 |
| 27 SAHH酶活性的测定 | 第80-81页 |
| 28 sahh全长基因的扩增 | 第81页 |
| 29 sahh基因上游序列的扩增 | 第81-82页 |
| 30 sahh基因的表达分析 | 第82-84页 |
| 结果与分析 | 第84-131页 |
| 1 草菇gpd基因cDNA全长的克隆及分析 | 第84-94页 |
| 2 草菇gpd基因组全长序列的克隆及序列分析 | 第94-97页 |
| 3 gpd基因上游序列的扩增 | 第97-99页 |
| 4 Southern杂交分析 | 第99-101页 |
| 5 Northern杂交分析 | 第101页 |
| 6 草菇低温全长cDNA文库的构建 | 第101-104页 |
| 7 草菇冷诱导相关基因的分离 | 第104-118页 |
| 8 cor3基因原核表达载体的构建 | 第118页 |
| 9 目的蛋白的分离与纯化草菇 | 第118-119页 |
| 10 SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度 | 第119-120页 |
| 11 目的蛋白等电点的测定 | 第120页 |
| 12 目的蛋白酶活性的测定 | 第120-121页 |
| 13 草菇sahh基因全长序列的获得 | 第121-127页 |
| 14 草菇sahh基因的上游序列的扩增 | 第127-129页 |
| 15 草菇sahh基因的表达分析 | 第129-131页 |
| 讨论 | 第131-136页 |
| 1 Northern杂交与半定量RT-PCR方法的比较 | 第131-132页 |
| 2 草菇gpd基因在草菇低温应答研究中的内标作用 | 第132页 |
| 3 草菇sahh基因与低温应答的关系 | 第132-134页 |
| 4 草菇sahh基因与细胞凋亡的关系 | 第134页 |
| 5 低温诱导相关基因功能研究的途径 | 第134-135页 |
| 6 内源启动子的克隆为构建草菇表达载体提供元件 | 第135-136页 |
| 全文总结 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-147页 |
| 附录 | 第147-148页 |
| 发表文章 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149页 |