| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 痢疾志贺菌A1型 IroN、ShuA单、双突变体的构建及功能分析 | 第13-80页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一节 材料与方法 | 第15-34页 |
| 1. 实验材料 | 第15-21页 |
| ·菌株与生长条件 | 第15-16页 |
| ·质粒 | 第16页 |
| ·细胞系 | 第16页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·所用扩增及测序引物 | 第16-17页 |
| ·试剂、常用溶液和培养基的配制 | 第17-19页 |
| ·实验用酶和试剂盒 | 第19页 |
| ·实验器材与仪器 | 第19-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-34页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第21页 |
| ·连接反应 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·质粒 DNA的快速小量制备 | 第22页 |
| ·基因芯片的实验操作步骤 | 第22-30页 |
| ·DNA的T载体序列测定 | 第30页 |
| ·生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| ·细胞感染实验 | 第31-32页 |
| ·噬斑分析 | 第32页 |
| ·细菌在细胞内存活实验 | 第32-33页 |
| ·细胞染色 | 第33页 |
| ·豚鼠角膜结膜炎实验 | 第33-34页 |
| 第二节 突变株的构建 | 第34-54页 |
| 1. IroN缺失突变株(MTS-1)的构建 | 第34-43页 |
| ·重组同源臂区域的选取和引物设计 | 第34页 |
| ·entry载体的构建 | 第34-36页 |
| ·destination载体的构建 | 第36页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第36-39页 |
| ·同源重组过程 | 第39-41页 |
| ·突变株的获得和验证 | 第41-43页 |
| 2. ShuA插入突变株(MTS-2)的构建 | 第43-49页 |
| ·重组同源臂区域的选取和引物设计 | 第43页 |
| ·entry载体的构建 | 第43-45页 |
| ·destination载体的构建 | 第45页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·同源重组过程 | 第45-46页 |
| ·突变株的获得和验证 | 第46-49页 |
| 3. IroN、ShuA双敲除突变株(MTS)的构建 | 第49-52页 |
| ·同源重组质粒的制备 | 第49页 |
| ·同源重组 | 第49-50页 |
| ·双突变株的获得和验证 | 第50-52页 |
| 4. 小结 | 第52-54页 |
| 第三节 突变株性状与功能检测及表达谱分析 | 第54-72页 |
| 1. 突变株性状与功能检测 | 第54-60页 |
| ·正常培养基条件下的生长情况 | 第54页 |
| ·铁限制条件下的生长情况 | 第54-56页 |
| ·细胞水平对突变株和野生株的比较实验 | 第56-58页 |
| ·突变株毒力的动物实验检测 | 第58-60页 |
| 2. 突变株和野生株的表达谱分析 | 第60-71页 |
| ·RNA的制备 | 第60-61页 |
| ·表达谱分析 | 第61-71页 |
| 3. 小结 | 第71-72页 |
| 第四节 结论 | 第72-73页 |
| 第五节 讨论 | 第73-80页 |
| 第二章 痢疾杆菌毒力因子及研究方法综述 | 第80-102页 |
| 第一节 痢疾杆菌毒力因子 | 第80-98页 |
| 1. 痢疾杆菌侵袭性质粒上的毒力决定因子 | 第82-87页 |
| 2. 染色体上的毒力相关基因 | 第87-94页 |
| 3. 痢疾杆菌毒力基因的调控 | 第94-98页 |
| 第二节 病原菌毒力基因的研究方法 | 第98-102页 |
| 1. 突变方法 | 第98-99页 |
| 2. 差异表达识别法 | 第99-102页 |
| 结束语 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 附录 | 第112页 |